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18354255512新蟲 (小有名氣)
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[求助]
載體構(gòu)建 已有5人參與
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構(gòu)建載體過程中，將我的目的片段大約1000bp連接到pcambia1302載體上，挑的克隆做菌落pcr帶很亮，但測(cè)序一直無信號(hào)，已經(jīng)做了一個(gè)多月了，重新連接轉(zhuǎn)化了好幾次了，都是無信號(hào)，是怎么回事��？求大神指點(diǎn) @biostar2009 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-21 12:59:47
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不知道你測(cè)序是自己做的還是公司做的，測(cè)序引物是什么？ 測(cè)序沒有信號(hào)一般就兩個(gè)原因，一是測(cè)序引物在質(zhì)粒上沒有匹配序列，即質(zhì)粒構(gòu)建錯(cuò)誤或者測(cè)序引物不對(duì)，既然你的菌P沒有問題，建議采用你做菌P的引物測(cè)序，上下游做一個(gè)雙向測(cè)，如還需要載體上序列，可以采用步移法測(cè)序；另一個(gè)可能的原因就是質(zhì)粒污染，測(cè)序峰非常混亂，從而表現(xiàn)出無信號(hào)，你既然做了很多次，這個(gè)應(yīng)該可以排除。祝你好運(yùn)！ |
2樓2016-07-21 09:56:16
781055707
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6樓2016-07-21 16:48:29
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3樓2016-07-21 11:01:12
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非常感謝你的提議，我是送公司做的，你所說的質(zhì)粒污染是我測(cè)序送的質(zhì)粒嗎，還是構(gòu)建過程中目的片段和載體的污染啊，不過我之前大多送的是菌液，就送過兩次質(zhì)粒，都測(cè)出來沒信號(hào) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-07-21 11:17:24
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5樓2016-07-21 11:19:06
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10樓2016-07-22 21:30:43
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