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ipade2012新蟲 (初入文壇)
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[求助]
單胺氧化酶抑制劑體外篩選體系的建立問題咨詢
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各位老師，你好！ 我是云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)研究生，我現(xiàn)在也正在做單胺氧化酶A抑制劑篩選體外實(shí)驗(yàn)，想請(qǐng)教老師一些問題，謝謝！ 問題一：老師，一些文章里提到測(cè)定單胺氧化酶A（MAO-A）活性的最適條件為100mmol/l,磷酸鉀緩沖液（pH=7.4），在篩選這個(gè)條件時(shí)，選去了300mmol/l、250mmol/l、200mmol/l、150mmol/l、100mmol/l、50mmol/l一些濃度的磷酸鉀緩沖液，請(qǐng)問老師300mmol/l、250mmol/l、200mmol/l的磷酸鉀緩沖液（pH=7.4）是怎么配制的？我現(xiàn)在需要200mmol/l的磷酸鉀緩沖液，但不知道怎么配制。 問題二：我查資料顯示常用的磷酸鹽緩沖液，磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉組成的緩沖對(duì),濃度為200mmol/l的有配制量表，磷酸氫二甲和磷酸二氫鉀組成的緩沖對(duì)，200mmol/l濃度的沒查到具體的配制量表，請(qǐng)問老師磷酸鈉與磷酸鉀緩沖液有差別嗎？對(duì)測(cè)試單胺氧化酶A的實(shí)驗(yàn)來說，謝謝！ 問題三：老師，我查閱其他一些文獻(xiàn)看到對(duì)測(cè)定單胺氧化酶A和單胺氧化酶B活性，磷酸鹽緩沖液的最佳 pH和摩爾濃度說法不一，我感覺老師文章里提到的還是蠻有道理的，其他些文獻(xiàn)里都沒怎么細(xì)分，就說這兩種酶統(tǒng)一 用0.2M磷酸鹽緩沖液（pH=7.6)來稀釋。他們所提到的磷酸晏緩沖液不知道是磷酸鈉緩沖液還是磷酸鉀緩沖液，有些疑惑。 問題四：老師有些文章里提到單胺氧化酶的來源是用大鼠肝臟勻漿自己提取制備的，感覺那樣老師會(huì)很辛苦，不知道老師都是怎么標(biāo)定蛋白含量的和怎么純化的？最后提取的酶的活力怎么樣？參考其他文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)有人用到重組人單胺氧化酶作為酶的來源，不知道哪位老師用過這種重組蛋白酶做過實(shí)驗(yàn)沒？不知道自己提取的和市場(chǎng)上買的酶是否差異性很大，是否可以用市售的來做？ 問題五：單胺氧化酶A的催化底物為5-羥色胺，而有些文獻(xiàn)選用的是5-HT肌酸酐單水合硫酸鹽，這個(gè)東西跟5-HT一樣嗎？文章里提到的單胺氧化酶A和單胺氧化酶B都催化特定的底物，而且有的文獻(xiàn)提到單胺氧化酶A和單胺氧化酶B所用的底物是同一個(gè)底物（酪胺），不知道底物的選擇對(duì)單胺氧化酶活性測(cè)定影響大嗎？謝謝！ 謝謝各位老師，祝老師工作愉快，打擾了！ |
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