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皮蛋同學(xué)新蟲 (小有名氣)
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[求助]
小分子DNA的純化問題（小于100bp），急！ 已有1人參與
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| 本人在做DNA的修飾轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化完成后有較多的有機(jī)溶劑（包括甘油等），現(xiàn)在需要對DNA進(jìn)行純化以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，之前試過一個(gè)盒子，說明書是適合100-400bp的，回收效率特別低。我的DNA是合成引物，不是基因組的，長度只有50-60bp，公司說最多能合成85bp, 查了一下現(xiàn)在市面上大多是適合基因組DNA純化的盒子，最少都要100bp。不知道各位大神有什么好的DNA純化方法。（PAGE什么的就不用啦，對于我的實(shí)驗(yàn)來說不太可能用膠回收的方法純化） |
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離心柱式分子篩(比如ge的g25或者g50)去掉有機(jī)溶劑和鹽等小分子，需要濃縮可以再用乙醇沉淀。如果只有甘油或者其它與水互溶的溶劑，也可以考慮用水稀釋后加乙酸鈉和糖原做乙醇沉淀。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2016-07-25 11:12:44
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【答案】應(yīng)助回帖
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G25：illustra MicroSpin G-25 Columns，貨號(hào)27-5325-01 G50：illustra MicroSpin G-50 Columns，貨號(hào)27-5330-01 我沒有試過有機(jī)溶劑下做乙醇沉淀，不過加了Glycogen之后乙醇沉淀可以回收非常稀的DNA，幾乎沒有損失，所以你可以大膽試試稀釋到什么程度有機(jī)溶劑就不會(huì)影響乙醇沉淀了。 |
4樓2016-07-25 22:04:37
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糖原隨便加點(diǎn)，一般1微升／20微克，多點(diǎn)少點(diǎn)都沒問題。乙酸鈉用3M的儲(chǔ)液，pH5.2，加1/9體積，也就是終濃度0.3M，如果本來的氯化鈉濃度超過0.2M可以不加。乙醇加2.5倍體積(最少2倍體積)，零下20度放一個(gè)小時(shí)以上，最長過夜也可以。小離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速(大離心機(jī)15000轉(zhuǎn))離心半小時(shí)，可以看到小小的白色沉淀(有一種藍(lán)色的糖原可以看到藍(lán)色沉淀，更好)。去掉上清，加少許70%乙醇，振蕩洗滌，再離心5分鐘，去掉上清，開蓋放置幾分鐘待乙醇揮發(fā)干，加水或者te溶解。其余細(xì)節(jié)請隨便找一本分子克隆或者分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教材或者百度之。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
10樓2016-07-28 09:25:26
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3樓2016-07-25 15:54:29
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5樓2016-07-26 21:25:29
6樓2016-07-26 21:58:41
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7樓2016-07-28 08:58:45
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8樓2016-07-28 09:00:17
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9樓2016-07-28 09:05:55
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