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新人求教，請(qǐng)問(wèn)我想檢測(cè)一個(gè)外源基因在酵母中的表達(dá)水平，應(yīng)該準(zhǔn)備些什么 已有1人參與
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方法是不是用QRT-PCR呢？我看文獻(xiàn)上說(shuō)的采用這種方法，那我首先得提取RNA，反轉(zhuǎn)為cDNA,然后做PCR，PCR的過(guò)程中就使用某某試劑盒帶熒光信號(hào)的，然后檢測(cè)PCR結(jié)果，以熒光值來(lái)反應(yīng)mRNA的量。 1.原理是這樣的嗎？ 2.文獻(xiàn)中提到還得用管家基因作為參照對(duì)比，這又是為什么呢？ 3.管家基因我也得自己選取，然后設(shè)計(jì)相應(yīng)的PCR引物？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-07-25 21:53:57
kaoyanjiu: 金幣+10, ★★★很有幫助, 解決了我的三個(gè)疑問(wèn)，謝謝。 2016-07-26 16:17:19
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-07-25 21:53:57
kaoyanjiu: 金幣+10, ★★★很有幫助, 解決了我的三個(gè)疑問(wèn)，謝謝。 2016-07-26 16:17:19
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首先，我沒(méi)做過(guò)外源基因表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)，我做的只是本身含有的基因表達(dá)量； 1.原理確實(shí)是這樣的 2.熒光定量分為絕對(duì)定量和相對(duì)定量，一般相對(duì)定量簡(jiǎn)單一些，管家基因就是做相對(duì)定量用到的，管家基因相當(dāng)于是內(nèi)參，我用的是actin 3.管家基因看你用那種，有的需要自己去篩選 |
2樓2016-07-25 17:17:47
3樓2016-07-26 16:20:06
曼陀羅的祈禱
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4樓2016-07-26 18:48:06
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beta_actin在好多生物中都存在，我想問(wèn)怎么在NCBI上畢赤酵母編碼找到beta-actin的基因，我現(xiàn)在就是卡在這個(gè)上，然后根據(jù)這個(gè)基因設(shè)計(jì)引物是不能選擇跨內(nèi)含子的引物的吧？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2016-07-27 21:00:15
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