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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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岳大白

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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-31 08:06:11

載體和片段摩爾比1:3到1:5試一試，其實(shí)這是一個(gè)概率問(wèn)題，只不過(guò)你的成功鏈接的概率低而已，如果不能提高鏈接效率，那就增加驗(yàn)證的菌落數(shù)量，挑單菌落的時(shí)候多挑一點(diǎn)（十個(gè)以上），如果嫌麻煩的話，把五個(gè)單菌落混到一起，這樣十組就有50個(gè)，把這十組做pcr驗(yàn)證，如果有目的條帶的話就劃板,之后十分之一的概率能挑到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。

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21樓2016-07-30 22:00:33

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岳大白

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前邊說(shuō)錯(cuò)了，應(yīng)該是五分之一的概率調(diào)到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子

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22樓2016-07-30 22:03:14

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小冀-

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【答案】應(yīng)助回帖

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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-31 08:06:19

加大片段的量試試，如果還是不行，最簡(jiǎn)單的辦法就是重新找酶切位點(diǎn)，重新做了

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···

23樓2016-07-31 00:07:20

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tfytli

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【答案】應(yīng)助回帖

用磷酸酶把酶切位點(diǎn)5‘端的磷酸基團(tuán)去掉就不會(huì)自連了，但是不要去目的片段的

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最令人信服的話莫過(guò)于一本正經(jīng)的胡說(shuō)八道，外加一點(diǎn)數(shù)據(jù)。

24樓2016-07-31 11:50:18

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coshark

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25樓2016-07-31 22:50:05

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tjabhm

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26樓2016-08-01 10:10:15

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引用回帖:

9樓: Originally posted by 弒者星魂 at 2016-07-28 17:45:06
你做鏈接時(shí)vector和insert的比例用的多少，我們實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證過(guò)，比例對(duì)連接的效率影響非常大

你好~請(qǐng)問(wèn)一般怎么去判斷加入的比例呢
謝謝

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努力翻身

27樓2016-08-31 17:41:54

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引用回帖:

16樓: Originally posted by 弒者星魂 at 2016-07-30 08:21:59
直接說(shuō)摩爾數(shù)不就行了，我們一般采用1：3-1：10之間，因?yàn)楣浪悴粶?zhǔn)確，所以我們做一組高比例，在做一組低比例的，轉(zhuǎn)化前混合。這樣的好處是只要有一組比例合適，就有足夠量的連接產(chǎn)物。
...

請(qǐng)問(wèn)高低兩個(gè)濃度轉(zhuǎn)化前混合，是怎樣操作的呢

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努力翻身

28樓2016-08-31 17:43:17

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28樓: Originally posted by ss2032 at 2016-08-31 17:43:17
請(qǐng)問(wèn)高低兩個(gè)濃度轉(zhuǎn)化前混合，是怎樣操作的呢...

他倆直接混合或者你把感受態(tài)加到兩管中之后再混合。

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29樓2016-08-31 21:52:07

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引用回帖:

27樓: Originally posted by ss2032 at 2016-08-31 17:41:54
你好~請(qǐng)問(wèn)一般怎么去判斷加入的比例呢
謝謝...

我們粗略估計(jì)一下，就是根據(jù)鏈接之前的瓊脂糖電泳亮度

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30樓2016-08-31 21:53:50

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