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yechj新蟲 (初入文壇)
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[求助]
純化蛋白時(shí)如何確定洗脫用咪唑的濃度 已有2人參與
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我最近用pET24b表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)一個(gè)帶有his標(biāo)簽的蛋白（79.5kD）。幾次表達(dá)純化（不同條件）后發(fā)現(xiàn)，菌的裂解液上清中純化不到目的蛋白，而沉淀中有大量的目的蛋白。于是我純化沉淀中的目的蛋白，制備抗體。 純化時(shí)用的Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,10 mM 咪唑，pH8.0; Washing buffer:50 mM NaH2PO4,300mM NaCl ,40 mM 咪唑，pH8.0; Elution buffer:50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,250 mM 咪唑，pH8.0; 洗脫液分別取20微升跑SDS-PAGE膠，結(jié)果如圖所示，我后面再做這個(gè)蛋白的純化時(shí)該如何選擇洗脫用咪唑的濃度呢？請(qǐng)各位大俠指點(diǎn)！ 蛋白純化.png |
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5樓2016-08-04 08:40:48
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