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[交流]
放射免疫對(duì)流電泳
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（一）原理 將放射性元素標(biāo)記的抗體(或抗原)與相應(yīng)的抗原(或抗體)沉淀時(shí),沉淀線通過自顯影而證實(shí)。所謂自顯影,就是通過復(fù)合物中的標(biāo)記同位素在蛻變過程中放出的射線,作用于感光材料的鹵化銀晶體而產(chǎn)生潛影,再經(jīng)過顯影把“像”顯示出來。這樣,能檢出肉眼看不見的沉淀線,從而提高反應(yīng)的敏感性,這種方法可應(yīng)用于凝膠中的所有反應(yīng)。 （二）材料 1、放射性同位素標(biāo)記的抗原或抗體 2、X—射線膠片或全色膠片 3、顯影液與定影液 4、其它同對(duì)流免疫電泳 （三）操作方法 1、按對(duì)流免疫電泳制備凝膠板并打孔。 2、加樣陰極端孔內(nèi)加抗原,陽極端孔內(nèi)加抗體。在加被檢抗體樣品時(shí),迅速加入標(biāo)記抗原(2 000~3 000cpm),并使之混合,勿使抗原吸收后再加標(biāo)記抗原,以免由于標(biāo)記原的滯面而形成假陽性。 3、電泳電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。 4、電泳后,平板浸在3%HCl中漂洗8h,換液2次。 5、用流水漂洗過夜。 6、干燥室溫或鼓風(fēng)機(jī)吹干。 7、曝光在暗室將膠片切成與平板一樣大小,然后將藥面密接凝膠面,再在膠片上壓一張玻板,用黑布包嚴(yán),皮筋扎緊,曝光時(shí)間與所用同位素及保存期有關(guān)。181I,一周內(nèi)5h~10h;1~2周內(nèi)24h;2~3周內(nèi)48h。125I,在2個(gè)月內(nèi)10h。 8、沖洗全色膠片沖片方法,水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干,觀察結(jié)果。 （四）結(jié)果判定 在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者,判為陽性。 |
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