 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 934 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
細(xì)胞凋亡檢測之選擇指南
|
|
當(dāng)細(xì)胞死亡時，研究人員往往會奮力排查死亡原因。他們采用各種分析，來確定細(xì)胞是經(jīng)歷了凋亡（apoptosis）、壞死（necrosis），還是程序性壞死（necroptosis），從而判斷特定環(huán)境是否有毒，或者確定藥物的作用機制。 凋亡是個復(fù)雜的過程，至少有兩種主要途徑 – 內(nèi)在和外在 – 導(dǎo)致了程序性細(xì)胞死亡。它們匯集于caspase蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)，最終破壞重要的細(xì)胞蛋白。確定哪條途徑被觸發(fā)，在哪個步驟被阻斷，以及抑制劑是否能夠抑制，催生了各式各樣的凋亡檢測。 它凋亡了嗎？ 人們以不同的凋亡標(biāo)志物為基礎(chǔ)，開發(fā)了通用的凋亡檢測，這些產(chǎn)品可單獨或聯(lián)合使用。形態(tài)變化，如細(xì)胞皺縮和細(xì)胞膜起泡，可在顯微鏡下觀察。磷脂酰絲氨酸從內(nèi)測翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜外側(cè)，則可以通過Annexin V來檢測。通過TUNEL檢測來標(biāo)記帶切口的DNA，可觀察染色體降解。caspase級聯(lián)反應(yīng)的激活則通過caspase及其產(chǎn)物的分析來實現(xiàn)。具體選擇哪一種，這取決于多個因素，包括細(xì)胞類型和樣品量、現(xiàn)有的設(shè)備和經(jīng)驗。 醫(yī)生通常并不關(guān)心哪些途徑或分子被觸發(fā)或阻斷，因為在開藥之前，研究工作已經(jīng)做了。而這些細(xì)節(jié)正是研究人員想要確定的。 Caspase檢測 caspase作為酶原，始終存在于細(xì)胞中。一些酶，如執(zhí)行者caspase 3和caspase 7，是組成型的二聚體，必須經(jīng)過切割和重排，才能形成活性位點。另一些酶，如啟動者caspase 8、9和10，是組成型單體，它們只有二聚化并招募到多蛋白復(fù)合物之后才激活1。 針對大多數(shù)感興趣的caspase，市場上已經(jīng)有了抗體。不過，由于caspase是組成型的，必須利用試劑來辨別活性和非活性形式，才能判斷它們是否參與了凋亡。抗體這種關(guān)鍵的試劑可用于各種檢測，包括流式分析、免疫組化、ELISA、Western blot和免疫熒光。 許多分析檢測caspase酶的活性，而不是酶本身。“有一些底物被caspase酶普遍切割，如PARP和核纖層蛋白，而我們有特異針對那些切割產(chǎn)物的抗體，”Cell Signaling Technology（CST）的產(chǎn)品開發(fā)專員Gary Kasof說。其他底物只被單個或少數(shù)幾個caspase切割。 當(dāng)然，市場上也有并非基于抗體的檢測。例如，許多廠商推出了廣泛和特定的caspase試劑盒，基于FLICA（熒光標(biāo)記的caspase抑制劑）檢測，其中小小的熒光分子穿過活細(xì)胞膜，不可逆地與caspase活性位點結(jié)合，而未結(jié)合的試劑被洗掉。相同的概念已被用于PET探針，其中F-18 PET標(biāo)記取代了熒光。 另一個選擇是使用一種細(xì)胞系，它缺少了你感興趣的特定caspase基因�！叭绻芯咳藛T認(rèn)為，他們已經(jīng)開發(fā)出一種藥物，觸發(fā)了癌細(xì)胞的凋亡，那么，這是一種快速而簡單的方法，來評估新藥是否通過這個途徑起作用，”Horizon Discovery的腫瘤項目經(jīng)理Nicola McCarthy談道，這家公司提供了一些單倍體caspase敲除產(chǎn)品。 除此之外 “我們也有其他的單倍體細(xì)胞系，它們?nèi)笔Я说蛲鐾緩降母鞣N組分，”McCarthy補充道。 “如果你只是對下游的caspase家族成員感興趣（這個家族至少有12種獨特的caspase蛋白），你將看到幾乎所有凋亡途徑的融合，”Bio-Rad公司Bio-Plex產(chǎn)品的全球產(chǎn)品經(jīng)理Daniel Braunschweig說。 不過，如果你只研究caspase，你也許會錯過內(nèi)在途徑調(diào)控的凋亡。“癌癥中缺乏凋亡，而神經(jīng)退行性疾病或心臟病的過度凋亡，往往是通過Bcl-2家族成員實現(xiàn)的�！被谶@個原因，Braunschweig表示，Bio-Rad Bio-Plex（基于Luminex）凋亡產(chǎn)品的重點放在Bcl-2家族。他認(rèn)為，單一的標(biāo)志物往往不足以清楚認(rèn)識凋亡背后的機制。 “每當(dāng)你想確定一個治療方案是否起作用，或者給疾病分期，你總是需要多個標(biāo)志物，”BioVision的技術(shù)支持專家Sunetra Ray談道。也許這解釋了流式細(xì)胞儀為何在凋亡研究中廣泛使用。 對于與凋亡內(nèi)在和外在途徑相互作用的其他分子和通路，人們最近也表現(xiàn)出濃厚的興趣。這包括凋亡抑制劑（IAP）家族和SMAC（IAP的抑制劑），它們的小分子模擬物已被開發(fā)出，以促進癌癥中的細(xì)胞凋亡。 了解凋亡，有許多方式，從通用的（它是否發(fā)生？）到特異的（針對caspase 9和Bax）。你需要仔細(xì)選擇。它可是關(guān)乎細(xì)胞生死的問題。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
299求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
070305高分子化學(xué)與物理 304分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
289求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
調(diào)劑求院校招收
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
調(diào)劑310
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 xmczhby 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070305高分子化學(xué)與物理 304分求調(diào)劑 +7 | c297914 2026-03-28 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +13 | 新時代材料 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 330分 085600材料與化工 +3 | gqhhh 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +12 | 大饞小子 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | 孅華 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +4 | 求求了收下我吧?/a> 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 林之夕 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +5 | 李嘉圖·S·路 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +5 | 1() 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4 | Higraduate 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿國科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|