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nawei8726至尊木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
煩請大俠幫忙設(shè)計下引物，謝謝 已有2人參與
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目的基因：phkg1 NM-001293144.1 主要是擴(kuò)CDS區(qū) 煩請煩請大俠幫忙設(shè)計下引物，謝謝 不勝感激  |
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2樓2016-08-07 18:59:26
xn8008
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3樓2016-08-07 20:10:35
nawei8726
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你好， 是構(gòu)建表達(dá)載體， 就是普通PCR，擴(kuò)增完整CDS區(qū)，構(gòu)建真核表達(dá)載體， 用primee5就可以了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-08-07 20:52:21
nawei8726
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你好， 是構(gòu)建表達(dá)載體， 就是普通PCR，擴(kuò)增完整CDS區(qū)，構(gòu)建真核表達(dá)載體， 用primer5就可以了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-08-07 20:53:23
nawei8726
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6樓2016-08-07 20:53:59
【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-08-07 22:12:38
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-08-07 22:12:38
| 你提供的信息仍然不夠。你是要以豬的RNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA為模板擴(kuò)增吧，一般構(gòu)建表達(dá)載體，需要擴(kuò)出完整的CDS區(qū)，并且為了構(gòu)建載體，根據(jù)插入位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物需要帶有相應(yīng)酶切位點(diǎn)，另外，你是要做融合表達(dá)還是獨(dú)立表達(dá)？這些因素都關(guān)系到引物設(shè)計。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
7樓2016-08-07 21:28:30
nawei8726
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8樓2016-08-07 21:38:41
nawei8726
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我之前設(shè)的引物跑出來目的條帶了，但是后來就不行了，總是重復(fù)不出來。 RNA濃度的1247.1ng/ul,OD值260/280為1.74,230/260為1.05,然后逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA的濃度4637.6ng/ul,OD值260/280為1.71，230/260為1.97,然后就是擴(kuò)不出來，真的心累啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-08-07 21:45:21
star013 
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10樓2016-08-08 18:29:20
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