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dengwy新蟲 (小有名氣)
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考馬斯亮藍法測蛋白質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)曲線做不出來，不知是哪里出了問題 已有1人參與
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我采用考馬斯亮藍法測定樣品中的蛋白質(zhì)含量，儀器是752N型紫外可見分光光度計，采用牛血清白蛋白（sigma）做標(biāo)準(zhǔn)曲線，現(xiàn)在問題就出在標(biāo)準(zhǔn)曲線上。根據(jù)文獻提供的方法： 1）稱取5mg牛血清白蛋白粉末（sigma牌），加去離子水定容至50ml，配置0.1mg/ml的牛血清蛋白溶液； 2）稱取100mg考馬斯亮藍G250試劑，先溶于50ml95%濃度的乙醇溶液中，然后再加入85%濃度的磷酸100ml，最后用去離子水定容至1000ml； 3）取6只試管分別加入0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml的牛血清蛋白溶液，并用去離子水定容至1.0ml； 4）向6只試管中加入5.0ml的考馬斯亮藍溶液，混合后靜置2~5min； 5）將標(biāo)準(zhǔn)樣品加入玻璃比色皿，用分光光度計測試樣品在595nm處的吸光度值。 通過上述方法測出來的標(biāo)準(zhǔn)樣品在蛋白濃度為0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0時的吸光度值分別為0；0.007；0.011；0.014；0.017；0.024。吸光度值很小，明顯小于文獻中報道的0.2~0.8范圍內(nèi)的測量值，而且線性也不理想。 為了提高吸光度值，將標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液濃度配制成1.0mg/ml，重復(fù)步驟2）~5），測出來的吸光度值反而更小（分別為0.024；0.001；0.000；0.000；0.001；-0.006），而且沒有任何規(guī)律，重復(fù)做了幾次都是如此。實在摸不清頭緒，不知道哪個環(huán)節(jié)出了問題，請各位達人不吝賜教啊~~~~ |
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