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dengwy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
考馬斯亮藍法測蛋白質(zhì),標準曲線做不出來,不知是哪里出了問題 已有1人參與
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我采用考馬斯亮藍法測定樣品中的蛋白質(zhì)含量,儀器是752N型紫外可見分光光度計,采用牛血清白蛋白(sigma)做標準曲線,現(xiàn)在問題就出在標準曲線上。根據(jù)文獻提供的方法: 1)稱取5mg牛血清白蛋白粉末(sigma牌),加去離子水定容至50ml,配置0.1mg/ml的牛血清蛋白溶液; 2)稱取100mg考馬斯亮藍G250試劑,先溶于50ml95%濃度的乙醇溶液中,然后再加入85%濃度的磷酸100ml,最后用去離子水定容至1000ml; 3)取6只試管分別加入0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml的牛血清蛋白溶液,并用去離子水定容至1.0ml; 4)向6只試管中加入5.0ml的考馬斯亮藍溶液,混合后靜置2~5min; 5)將標準樣品加入玻璃比色皿,用分光光度計測試樣品在595nm處的吸光度值。 通過上述方法測出來的標準樣品在蛋白濃度為0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0時的吸光度值分別為0;0.007;0.011;0.014;0.017;0.024。吸光度值很小,明顯小于文獻中報道的0.2~0.8范圍內(nèi)的測量值,而且線性也不理想。 為了提高吸光度值,將標準蛋白溶液濃度配制成1.0mg/ml,重復步驟2)~5),測出來的吸光度值反而更。ǚ謩e為0.024;0.001;0.000;0.000;0.001;-0.006),而且沒有任何規(guī)律,重復做了幾次都是如此。實在摸不清頭緒,不知道哪個環(huán)節(jié)出了問題,請各位達人不吝賜教啊~~~~ |
新蟲 (小有名氣)
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我現(xiàn)在做不出來標曲,就是按照你這個方法了,為什么你的值那么小,而我的確弄不出來,我前面兩個都是零點零幾,后面就零點一以上,請問考馬斯溶液稀釋后 ![]() ![]() ![]() 對測定有影響嗎發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
金蟲 (正式寫手)
新蟲 (小有名氣)
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