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吳梁新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
SUB Cloning
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在做CPISPR Off-target analysis 時(shí)候用到了單克隆，載體是P-blunt載體，添加了3ul PCR產(chǎn)物和0.3ul 的載體，室溫10min。感受態(tài)細(xì)胞冰上化凍后，與之前的混合物混在一起（沒(méi)有輕彈混勻），在冰上20min,42度下熱激30s，再在冰上3Min。加入500ul LB培養(yǎng)基。37度搖床1h。用的是卡鈉選擇培養(yǎng)基。之后送公司挑單克隆測(cè)序。 上述的步驟，除了沒(méi)混勻就沒(méi)什么錯(cuò)誤了，培養(yǎng)了一晚，什么都沒(méi)長(zhǎng)出來(lái)。之前重復(fù)過(guò)好多次，要么長(zhǎng)的量少，要么長(zhǎng)不出。 本人是實(shí)驗(yàn)小白，請(qǐng)大神指教。 |
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