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小慧xh新蟲 (初入文壇)
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[求助]
二硫鍵的檢測方法 已有1人參與
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| 求二硫鍵的檢測方法，具體特征峰是多少，謝謝 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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冰點(diǎn)降溫: 金幣+3, 謝謝回帖交流，歡迎來無機(jī)物化版塊。 2016-08-17 13:14:11
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現(xiàn)代生物質(zhì)譜學(xué)在最近十年發(fā)展非常迅速，大為提高了對蛋白質(zhì)分子的定性定量和翻譯后修飾的分析能力。 APT結(jié)合蛋白質(zhì)溶液內(nèi)的非還原酶解和LC-MS/MS，對供試品的二硫鍵配對方式進(jìn)行分析，明確供試品的各種鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵配對方式，并提供確定這些二硫鍵配對方式的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，包括一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)等。 本方法所檢測的樣品是蛋白質(zhì)或多肽類供試品，測量的是二硫鍵所在多肽分子的分子量，測定的是該多肽分子的氨基酸序列和二硫鍵配對方式。蛋白質(zhì)或者多肽供試品既可以是固體樣品，也可以是溶液樣品，供試品量不應(yīng)少于200μg。供試品如果為固體，應(yīng)為蛋白質(zhì)多肽凍干制品；如果為液體，樣品中蛋白質(zhì)多肽濃度應(yīng)盡可能在2mg/ml以上。 本方法檢測是二硫鍵配對方式和其所在多肽分子的氨基酸序列。二硫鍵所在多肽分子的分子量與理論值相差小于2 Da，其二級(jí)碎片分子量與理論值相差小于0.8 Da。對還原前后的二硫鍵所在多肽分子做色譜質(zhì)譜圖分析（XICs），其信號(hào)峰面積需有顯著差異。 二硫鍵測定方法所使用的儀器是，Thermo公司和GE公司生產(chǎn)的高校液相串聯(lián)質(zhì)譜儀LTQ-Velos質(zhì)譜儀和Ettan MDLC色譜系統(tǒng)。 |
2樓2016-08-16 16:05:46
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3樓2016-08-16 16:07:17
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