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靜默人聲412木蟲 (小有名氣)
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提取土壤DNA,用生工的柱式土壤基因組提取試劑盒，可以提出DNA,但是PCR擴增不出來。 已有1人參與
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提取土壤DNA,用生工的柱式土壤基因組提取試劑盒，可以提出DNA,但是PCR擴增不出來�，F(xiàn)在先用PVP緩沖液預(yù)處理土壤，清洗了6遍直到緩沖液變清，再用試劑盒提取DNA,但是用提取液跑電泳沒有條帶，PCR也沒有條帶。 之前這樣做只要模板DNA有帶，'PCR就有條帶，但目前為止只有一個有帶。 不知道是什么原因，有什么解決辦法嗎？ 我覺得是清洗液的原因，導(dǎo)致DNA得率降低。 PVP緩沖液：TRis-HCL 50mM EDTA 20mM NaCL 100mM PVP 0.01g/ml PH 10 清洗步驟：300mg+3mlPVP緩沖液，漩渦振蕩3min，在65℃水浴3min，再漩渦振蕩3min，室溫離心8000r，10min，棄上清，重復(fù)洗滌至上清液較為澄清。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2016-08-22 09:27:51
fanfan9056
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3樓2016-08-22 09:28:10
allenchem
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土壤中的PCR抑制劑成分主要是腐殖酸，判斷依據(jù)就是最后的DNA溶液的顏色。如果是無色或者淡淡的色，那還好。如果是深黃色或者褐色，那很難p出來的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-08-22 10:16:11
靜默人聲412
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加入高鹽溶液后，顏色是深棕色，用TE緩沖液洗脫后，是淡黃色。模板稀釋后還是P不出來。 用PVP緩沖液清洗土壤后，提DNA成功了一個，之后DNA提不出來，清洗后是不是把微生物洗掉了，所以提不出DNA.但是我看的文獻上說這樣預(yù)處理。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-08-22 10:57:00
allenchem
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8樓2016-08-25 07:13:01
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