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Q不Q新蟲 (初入文壇)
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[求助]
載體去磷酸化后為什么不能自連但能和目的片段相連？ 已有1人參與
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在網(wǎng)上搜原理時(shí)候是這樣說的 5'端的磷酸基團(tuán)對(duì)于DNA連接是必須的，用堿性磷酸酶處理切開的載體后，載體不能在DNA連接酶的作用下自連，而目的基因片段兩端是有5'端的磷酸基團(tuán)的，可以在DNA連接酶的作用下與載體連接。 所以堿性磷酸酶處理可以防止質(zhì)粒載體DNA自連的作用。 但是我想問目的片段的兩條鏈中只有一條鏈可以與載體的一條鏈相連？如何讓載體5'端去磷酸化的這條鏈一條鏈也連接起來？ |
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xuweitao
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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如你所說，連接不能發(fā)生在載體5'端和片段3'端對(duì)接處，但是不妨礙載體3'端和片段5'端處的對(duì)接。 這樣的結(jié)果是每條產(chǎn)物鏈都有一個(gè)缺口，都是線性的而非環(huán)狀。但是互補(bǔ)的兩條鏈中缺口位置是互相錯(cuò)開的，任然有較長(zhǎng)序列是互補(bǔ)配對(duì)。 這樣的兩條線性鏈任然可以形成一個(gè)環(huán)狀產(chǎn)物，只是有兩個(gè)單邊缺口而已。 這種有缺口的環(huán)狀產(chǎn)物在轉(zhuǎn)化進(jìn)入細(xì)胞后有幾率被細(xì)胞修復(fù)而成為完整的質(zhì)粒進(jìn)而被正常復(fù)制。 |
3樓2017-07-21 10:06:46
蔡小蕾99
新蟲 (小有名氣)
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2樓2017-07-20 16:45:16
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