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雙向免疫擴散法測定抗血清效價實驗
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實驗方法原理 將抗原和相應抗體分別加入同一凝膠板中的相鄰小孔中，使兩者互相擴散，當擴散到它們的濃度達當量點時(濃度相當)形成沉淀線。如果抗原-抗體的濃度合適時，沉淀線在兩孔的中間。如抗體過量，沉淀線靠近抗原孔。如抗原過量，沉淀線靠近抗體孔。此技術可以測定抗血清的效價。 此外，根據(jù)沉淀融合的情況，還可以鑒定兩種抗原是否完全相同。兩種抗原部分相同的情況下，則形成部分交叉和部分融合的沉淀線 實驗材料 人IgG 兔抗人Ig 試劑、試劑盒 生理鹽水 瓊脂 硫柳汞 疊氮化鈉 儀器、耗材 載玻片 水平儀 打孔器 有蓋的搪瓷盤 酒精燈 牙簽 微量加樣器 恒溫培養(yǎng)箱 實驗步驟 1. 將盛有3 ml生理鹽水瓊脂的小試管置水浴中熔化。 2. 將熔化好的瓊脂小心倒入已調好水平的載玻片上，每塊厚度為1 mm。 3. 瓊脂凝固后，按模板打孔，孔內的瓊脂如未被吸出則可用牙簽挑出，中心孔為加抗原的孔，四周的6個孔為加抗體的孔，孔徑3 mm，孔距4 mm。打孔后將玻片于酒精燈上烤背面(溫度不宜過高，以不燙手為宜)，使瓊脂與玻片粘緊。 4. 將兔抗人IgG按二倍稀釋法稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32的不同濃度。 5.從上到右到下到左的順時針方向將不同稀釋度的抗體定量加入周圍五孔，第六孔加生理鹽水作為對照(千萬不要溢出或漏在瓊脂膠上)。 6.小心將板放入濕盒內，置37 ℃溫箱，經(jīng)24 h擴散，第二天觀察。 7.觀察沉淀帶的出現(xiàn)情況并畫下來，在有沉淀出現(xiàn)的稀釋抗原中，稀釋倍數(shù)最大的一孔的抗原稀釋倍數(shù)即為抗體效價。 |
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