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[交流]
免疫電泳實驗
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一、基本原理 免疫電泳法是將凝膠電泳與雙向免疫擴散兩種技術(shù)相結(jié)合的一種實驗方法。在電場作用下標(biāo)本中各組分因電泳遷移率不同而分成區(qū)帶,然后沿電泳平行方向?qū)⒛z挖一溝槽,將抗體加入溝槽內(nèi),使抗原與抗體相互擴散而形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置及形狀,分析標(biāo)本中所含各組分的性質(zhì),本實驗常用于抗原分析及免疫性疾病的診斷。 二、實驗材料 1%離子瓊脂(pH8.6巴比妥緩沖液加入等量蒸餾水,再加入1%瓊脂。溶解后用脫脂棉過濾,分裝,實驗前加熱溶解置56℃-60℃水浴箱中平衡溫度備用)。免疫電泳用玻片待檢血清人IgG(1mg/ml) 抗人全血清抗體(購自北京中山公司) 微量加樣器及塑料吸頭 尖吸管及橡皮吸頭 打孔器、解剖刀、尺、打孔模板、濕盒等。 電泳儀:將pH8.6巴比妥緩沖液注入電泳槽內(nèi)(注意正負極各槽內(nèi)所加入的量應(yīng)在同一水平)。并將濾紙裁至適當(dāng)長度和寬度以備搭橋使用。 三、實驗方法 1.將溶化的1%離子瓊脂傾注于玻片上制成瓊脂板。 2.瓊脂板冷卻凝固后,按照模板于挖槽線上下兩側(cè)各打一個孔,并分別用微量加樣器加入待檢血清及人IgG各15ul。 3.將瓊脂板置于電泳槽內(nèi),注意電泳標(biāo)本應(yīng)放負極“―”一側(cè)。并將已浸透緩沖液的濾紙一端覆蓋于瓊脂板兩側(cè)各約0.5cm,另一端浸于電泳液中。 4.接通電源,電壓、電流及電泳時間應(yīng)視儀器性能而定。一般電勢梯度6 V/cm,電流每板20mA,泳動時間1-2小時。 5.電泳完畢,關(guān)閉電源,取出瓊脂板,按模板位置用解剖力挖橫槽。用特制尖吸管加入抗人全血清抗體。 6.將瓊脂板置于濕盒中,于37℃溫箱中擴散24小時。 四、實驗結(jié)果 根據(jù)沉淀弧的位置及形狀,參照免疫球蛋白遷移范圍示意圖,識別主要Ig。 |

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