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ysk1989
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[交流]
細(xì)胞培養(yǎng)該不該加抗生素？
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細(xì)胞有沒(méi)有正常生長(zhǎng)，或細(xì)胞是否污染，是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。雖然，順利的時(shí)候，細(xì)胞培養(yǎng)起來(lái)很簡(jiǎn)單，可不順的時(shí)候就會(huì)出現(xiàn)各種問(wèn)題-------細(xì)胞 污染啦、細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢啦、細(xì)胞形態(tài)看著不對(duì)勁啦、死細(xì)胞率多啦。。。。。。。。畢竟，細(xì)胞作為一種體外培養(yǎng)的物質(zhì)，受許多外界因素的影響，培養(yǎng)基、血清、 孵育溫度，CO2濃度。。。。。。除此之外，還有一種影響因素就是抗生素。 一般來(lái)說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)是不需要加抗生素， 畢竟細(xì)胞培養(yǎng)是個(gè)無(wú)菌技術(shù)。如果你的實(shí)驗(yàn)室污染嚴(yán)重，建議徹底打掃一下，新潔爾滅擦拭消毒，紫外照射殺菌。然后把你細(xì)胞實(shí)驗(yàn)涉及到的試劑都做遍肉湯培養(yǎng)！ 再就是注意無(wú)菌操作，注意其它培養(yǎng)基、胎牛血清、胰酶等別污染了。如果實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌條件優(yōu)異，那細(xì)胞培養(yǎng)是不建議加抗生素的；特別是用于細(xì)胞治療的培養(yǎng)。 沒(méi)有進(jìn)行過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的新手，對(duì)無(wú)菌技術(shù)沒(méi)有信心的，或者提取的原代細(xì)胞，怕污染的，（畢竟實(shí)驗(yàn)成功失敗對(duì)新手來(lái)說(shuō)意義重大）可以適量添加抗生素。 個(gè)人認(rèn)為還是不要加抗生素的好，因?yàn)榭股匾灿卸拘�，有些抗生素的藥效濃度水平與毒效濃度水平非常接近，對(duì)細(xì)胞多少有傷害。但如果你們實(shí)驗(yàn)室污染嚴(yán)重的話，可以這樣添加： １、最常用的是青霉素、鏈霉素聯(lián)合抑制細(xì)菌，即所謂的“雙抗”，主要針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌；對(duì)于細(xì)菌的感染也可用慶大或卡那霉素； ２、如果真菌污染嚴(yán)重，可用兩性霉素／制霉菌素控制； ３、若為支原體污染，可用慶大霉素／四環(huán)素／紅霉素； 抗生素多加對(duì)細(xì)胞無(wú)益。加抗生素的主要問(wèn)題是操作不慎造成的污染未必能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，造成后期較大的損失。 青鏈霉素是廣譜抑菌劑，對(duì)革蘭氏陰性和陽(yáng)性細(xì)菌有抗菌性，青霉素影響細(xì)菌細(xì)胞壁合成的終末步驟，在轉(zhuǎn)肽反應(yīng)步驟一直多肽鏈的延伸；鏈霉素與核糖體的30S亞基單位結(jié)合，阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)的組成。比較常用 。一般用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。 一旦細(xì)胞污染，最佳處理辦法扔掉，查找原因，全面預(yù)防。如果細(xì)胞是經(jīng)過(guò)大量工作或高價(jià)才得到的，扔掉實(shí)在可惜，可以針對(duì)污染源加抗生素。也可以不加抗生素進(jìn)行單克隆有限稀釋至96孔板，再克隆化。關(guān)鍵是找到污染源，這才是治本的辦法；如果原因不明，建議徹底消毒細(xì)胞培養(yǎng)箱，重新配置PBS，胰酶、培養(yǎng)基等，就像電腦中毒后重裝系統(tǒng)一樣。 污染不是靠用抗生素能解決的。關(guān)鍵是要做好細(xì)胞房的管理和消毒。 文章來(lái)源：英格恩技術(shù)的官方博客，原文詳見(jiàn)： http://www.engreen.cn/細(xì)胞培養(yǎng)該不該加抗生素 |
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