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cheng910323木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
引物設(shè)計(jì)： 如何避開(kāi)終止子 避免移碼？求教幫修改下�。�！ 已有1人參與
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R-Spe1R（3丶）： tagcta ACTAGT GTTCTTAGACTGCCAACAACCGTGC 這是我自己設(shè)計(jì)的引物 不知是否可以避開(kāi)終止子避免移碼現(xiàn)象？ 目的基因后半段：AACTCGCAGAACCTTCCATTTGATCCCTCCAAGGCTGTTCCGCGTCTAACCCGTTGGGAA ATTGATCTCAATAGTGGTAACGATGAGATGAAACGTACGCAGCTACACGAATATTTTGCA GAAATGCCTATCATGGATTTCCGTTTTGCGCTCCAGGATCATCGCTACGCCTACATGGGG GTTGACGATCCTCGTCGCCCCTTAGCTCATCAGCAAGCTGAAAAAATCTTTGCCTACAAT TCGTTAGGGGTTTGGGACAACCATCGTAAAGATTATGAACTTTGGTTTACGGGAAAAATG TCTGCAGCGCAGGAACCGGCGTTTGTTCCTAGAAGCCCAGATGCGCCTGAGGGCGATGGC TACCTACTCAGTGTAGTAGGGCGGCTCGATGAAGATCGTAGCGATCTAGTTATCCTTGAT ACGCAATGTTTGGCAGCTGGGCCTGTGGCCACTGTCAAGCTTCCCTTCCGTCTCCGAGCA GCGTTGCACGGTTGTTGGCAGTCTAAGAACTGA TGA 避開(kāi)這個(gè)@biostar2009@飛約瘋?cè)嗽?/u>@wizardfan@youlinglyw |
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cheng910323
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-08-26 08:44:51
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補(bǔ)充一下 .這段引物是和下面目的基因匹配的！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2016-08-25 23:10:38
781055707
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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3樓2016-08-26 08:05:46
cheng910323
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R-Spe1R（3丶）： tagcta ACTAGT GTTCTTAGACTGCCAACAACCGTGC 這是我自己設(shè)計(jì)的引物 不知是否可以避開(kāi)終止子避免移碼現(xiàn)象？ 后續(xù)有酶連接 表達(dá)蛋白 所以 擔(dān)心移碼 導(dǎo)致蛋白無(wú)法表達(dá)正常！ 目的基因后半段：AACTCGCAGAACCTTCCATTTGATCCCTCCAAGGCTGTTCCGCGTCTAACCCGTTGGGAA ATTGATCTCAATAGTGGTAACGATGAGATGAAACGTACGCAGCTACACGAATATTTTGCA GAAATGCCTATCATGGATTTCCGTTTTGCGCTCCAGGATCATCGCTACGCCTACATGGGG GTTGACGATCCTCGTCGCCCCTTAGCTCATCAGCAAGCTGAAAAAATCTTTGCCTACAAT TCGTTAGGGGTTTGGGACAACCATCGTAAAGATTATGAACTTTGGTTTACGGGAAAAATG TCTGCAGCGCAGGAACCGGCGTTTGTTCCTAGAAGCCCAGATGCGCCTGAGGGCGATGGC TACCTACTCAGTGTAGTAGGGCGGCTCGATGAAGATCGTAGCGATCTAGTTATCCTTGAT ACGCAATGTTTGGCAGCTGGGCCTGTGGCCACTGTCAAGCTTCCCTTCCGTCTCCGAGCA GCGTTGCACGGTTGTTGGCAGTCTAAGAACTGA 避開(kāi)最后這個(gè)TGA 終止子 藍(lán)色字體是引物匹配的堿基序列 紅色的是終止子 酶切位點(diǎn)為SPE1：A CTAGT TGATC A |
4樓2016-08-26 10:33:39
cheng910323
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5樓2016-08-26 10:46:56
txhy
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 沒(méi)問(wèn)題，“GTTCTTAGACTGCCAACAACCGTGC”這段堿基你是完全配對(duì)的，所以在引物與模板結(jié)合時(shí)可以結(jié)合上去，正常進(jìn)行PCR反應(yīng)，后面的不配對(duì)堿基不會(huì)影響的。在第二輪循環(huán)中，就能得到帶“ tagcta ACTAGT ”的雙鏈產(chǎn)物了，多次循環(huán)下來(lái)后你設(shè)計(jì)得到的產(chǎn)物就占絕大多數(shù)比例了。 |
6樓2016-08-27 23:43:32
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