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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 免疫實驗 » 流式細胞凋亡檢測問答
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流式細胞凋亡檢測問答
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1. Q：要做胃粘膜組織的DNA含量及倍體檢查，但取材后要等幾個星期才會做流式細胞術檢查，請問：胃組織要怎樣保存好呢？用低溫保存，還是用乙醇固定？或者固定后再低溫下保存？ A：我做過乳腺細胞的DNA含量測定，取得組織以后，先處理成單細胞懸液，然后再加70%冰乙醇固定，要保證冰乙醇的最終濃度為50%，這樣固定的細胞懸液可以至少保存12小時，最多可保存一個月，上機檢測前再加PI綜合染液。我就是這樣做的，保存了將近三個星期，結果還可以，變異系數(shù)為5%. 2. 實驗中想用PI分析細胞周期及凋亡率，請教幾個問題： Q：（1）所用的RNAs酶用什么配制呢？用PBS配嗎？ A：RNaseA用PBS配制沒有問題，但是注意要沸水浴去除DNase的活性。 Q：（2）測細胞周期和凋亡率時都要用RNAs酶，可以一起檢測嗎？ A：用流式細胞儀測定時細胞周期和凋亡率是同時測定的，不用擔心。 Q：（3）TritonX-100是固定劑吧，用了70%的冷乙醇（是4℃嗎？），是不是就不用Triton X-100固定了？ A：Triton X-100是起透化作用的，不是固定劑，可以用75%的乙醇于-20度固定。 Q：（4）還要設什么內參標準（5%雞紅細胞）嗎？ A：對照肯定是需要的，這個根據(jù)自己的需要進行設置。 Q：（5）不用試劑盒行不行��？ A：完全可以不用試劑盒。 哈哈 自問自答舍我其誰  |
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