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jiangpozi新蟲 (小有名氣)
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[求助]
in vivo crosslink蛋白交聯(lián)
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看到有很多文獻(xiàn)用戊二醛處理蛋白樣品,然后跑SDS-PAGE再做blot，用特異性抗體標(biāo)識同源二聚體或三聚體、四聚體的蛋白。我有幾個問題想問，希望戰(zhàn)友們幫我解疑 ： 1、如果我要做的蛋白同時存在四聚體和二聚體，可以同時標(biāo)識出來兩種多聚體的量么； 2、細(xì)胞或者組織用含有NP-40的蛋白裂解液提取的蛋白樣品，能直接加入0.005%-0.1%的戊二醛進(jìn)行交聯(lián)么？我看有些方法說用PBS配制的戊二醛進(jìn)行交聯(lián)，難道是說細(xì)胞和組織蛋白不要用Lysis buffer提取，直接用PBS收集蛋白么？ 3、如果已經(jīng)加了SDS和巰基乙醇配制的loadingBuffer的蛋白樣品，可以再加入戊二醛進(jìn)行蛋白的交聯(lián)么？我覺得SDS和巰基乙醇應(yīng)該會破壞蛋白的二級結(jié)構(gòu)，那么交聯(lián)過后的蛋白樣品是否改變Loading buffer的配制方法？ 除了使用戊二醛，還有別的更好的方法進(jìn)行同源二聚體量的檢測么？ 比如DMS, DMA，但是沒有具體的操作步驟，請大家多多幫助！ |
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jiangpozi
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2樓2016-08-30 14:00:08
pursuream
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- 專業(yè): 基因組學(xué)
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發(fā)個廣告嘍，雖然可能幫不到你。 基于非天然氨基酸的光交聯(lián)，還有另外幾篇文章： Lin S, He D, Long T, Zhang S, Meng R, Chen P*, "Genetically Encoded Cleavable Protein Photocrosslinker", J. Am. Chem. Soc. (2014), 136, 11860-3. Zhang M, Lin S, Song X, Liu J, Fu Y, Fu X, Chang Z*, and Chen P*. “A genetically incorporated crosslinker reveals chaperone cooperation in acid resistance”, Nat. Chem. Biol. (2011), 7, 671-7. |
3樓2016-08-31 15:02:46
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