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田田den新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
目的片段膠回收后測(cè)序 套峰且發(fā)現(xiàn)突變20多個(gè)bp，重復(fù)兩次，發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)一致
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以質(zhì)粒做模板PCR，目的片段700bp, 模板已測(cè)序沒(méi)有問(wèn)題，目的片段膠回收后測(cè)序 測(cè)序結(jié)果是套峰且發(fā)現(xiàn)突變20多個(gè)bp，重復(fù)兩次后，發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)一致， 1.用的高保真酶， 2.切膠回收時(shí)紫外照射時(shí)間不太長(zhǎng)， Q:1.懷疑是不是引物有問(wèn)題，因?yàn)楫?dāng)引物兩邊加上酶切位點(diǎn)以及保護(hù)堿基時(shí)PCR產(chǎn)物測(cè)序過(guò)沒(méi)有問(wèn)題， 2.引物GC含量比較高，但是設(shè)計(jì)的位點(diǎn)不能變動(dòng)，因?yàn)橐狿全長(zhǎng)，之后無(wú)縫連接到載體上 |
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Liumengya
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- 專(zhuān)業(yè): 生物信息學(xué)
2樓2016-09-03 12:49:37
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