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liling0601銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
基因擴增 已有2人參與
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| 近期做一個1000bp的小片段擴增，結(jié)果非目的條帶比目的條帶亮很多，挑5個單菌落測序回來，5個都一樣，和引物比對發(fā)現(xiàn)測序結(jié)果的引物倒數(shù)第二個堿基由A變成了T，請問這是引物設(shè)計問題還是退火溫度設(shè)計的不合適？如何調(diào)整 |
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010308Jing
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
2樓2016-09-12 16:29:01
3樓2016-09-12 20:55:56
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xn8008: 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-13 08:11:16
xn8008: 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-13 08:11:16
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It is not accurate in the primer annealing, and the PCR system is error prong. You can use your system to do mutagenesis now. I am not kidding. But if you do not need a mutagenesis PCR, so adjust all conditions of PCR including primer design to stricken the PCR. You need to know the rules to design the PCR, besides, PCR buffer and concentration, anealing temperature, etc all must be optimized. Please let me know if you cannot make it work. |
4樓2016-09-13 00:14:11
juzhixianwei
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
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- 在線: 28小時
- 蟲號: 1837107
- 注冊: 2012-05-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
5樓2016-09-13 12:39:07
6樓2016-09-13 20:42:07
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