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小肉xxh新蟲(chóng) (初入文壇)
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dna條帶 已有2人參與
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提取蛾子的dna做coii基因的pcr后，跑膠dna條帶為什么這么亂 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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2樓2016-09-18 00:59:21
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-18 09:03:04
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| 回憶一下，PCR反應(yīng)過(guò)程中是否有過(guò)斷電情況，如果沒(méi)有，請(qǐng)檢查你的引物特異性。從你的圖片來(lái)看，應(yīng)該是產(chǎn)物不單一，如果引物特異性沒(méi)有問(wèn)題，且PCR過(guò)程中一切正常，建議切下條帶，膠回收后測(cè)序（PS：就用你擴(kuò)增引物測(cè)序就可以）。如未闡述明白，可繼續(xù)追問(wèn)，祝好 |
3樓2016-09-18 08:41:23
小肉xxh
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線粒體COII基因：PCR擴(kuò)增引物為針對(duì)鱗翅目設(shè)計(jì)的引物，反應(yīng)程序參考劉曉燕等（2007） 正向引物EVA：5' GAGACCATTACTTGCTTTCAGTCACT 3' 反向引物PATRICK：5' CTAATATGGCAGATTATATGTATTGG 3' PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性1 min；94 ℃變性1min，45 ℃復(fù)性1min30s，72 ℃延伸1 min15s，6個(gè)循環(huán)；94 ℃變性1min，51 ℃復(fù)性1min30s，72 ℃延伸1 min15s，36個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min；12℃forever 這是為什么 都跑到100bp了 maker2000 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2016-10-15 21:55:47
小肉xxh
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5樓2016-10-15 22:06:53
didongwei
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6樓2016-10-15 22:08:06
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7樓2016-10-15 22:10:10
didongwei
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【答案】應(yīng)助回帖
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你的不是跑到100bp啦，100bp那是引物二聚體或者DNA片段，從你的電泳圖看，我認(rèn)為是復(fù)性溫度太低，導(dǎo)致特異性差 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
8樓2016-10-15 22:12:35
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