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[求助]
緊急求助，環(huán)境樣品PCR產(chǎn)物電泳條帶問(wèn)題
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我目前在擴(kuò)增環(huán)境樣品功能基因，電泳圖如下（紅色框內(nèi)為marker）： 我的目的條帶根據(jù)引物位置計(jì)算，目的條帶大小為362bp,加上引物的barcode長(zhǎng)度不到20，大概目的片段長(zhǎng)度是380. 目前電泳條帶很亂：1，根據(jù)目的條帶大小，出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的樣品（有兩條帶的）應(yīng)該是下面那一條帶是目的條帶，但是圖右邊數(shù)第2/3/6個(gè)樣品(黃框標(biāo)注)，條帶很亮且是單一條帶，大小都大于400bp, 不知是非特異性擴(kuò)增還是什么其它原因?qū)е碌模〉腜CR進(jìn)行了數(shù)月，好不容易出了條帶卻又出了這個(gè)問(wèn)題，跪求各位大神指教，多謝！ 電泳圖.PNG 捕獲.PNG |
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2樓2016-09-18 12:49:30
Freda_0829
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 81.3
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- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
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先檢查一下引物和模板是不是會(huì)錯(cuò)配，如果可以確定引物是正確的，可以適當(dāng)提高退火溫度以降低非特異性，或者加入適量DMSO。還有就是你的核酸膠是什么濃度的，一般來(lái)說(shuō)條帶較短用高濃度的膠比較好。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
3樓2016-09-18 13:20:52
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