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pl02544849新蟲 (初入文壇)
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[交流]
將ETEC全長lacZ基因連接至PMD18-T載體，發(fā)現(xiàn)IPTG誘導與否均呈藍色，是什么原因呢？
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| 用ETEC基因組作為模版，克隆了全長的lacZ基因（lacZ基因僅包含ORF和上游的SD序列，不含有啟動子），然后將這段lacZ基因連接到了PMD18-T載體上。這樣的話這個新載體應(yīng)該是受IPTG誘導的吧？但是實際做起來發(fā)現(xiàn)不論加不加IPTG，菌落均呈藍色。之后進一步做了ONPG試驗，結(jié)果誘導和不誘導的OD420nm結(jié)果差不多，有時候甚至不誘導的反而OD值更高。反復重復了挺多次，結(jié)果一直忽上忽下不穩(wěn)定，我也是新手，現(xiàn)在有些弄不明白，查了一些文獻，操作步驟也沒什么問題啊，想請教一下大家，謝謝啦。 |
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