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PCR條帶 已有5人參與
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目的片段308～出現(xiàn)了非特異性擴(kuò)增怎么辦，最后一個(gè)是 actin還有就是覺得條帶太亮太粗怎么辦？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-19 08:17:17
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-19 08:17:17
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Q1：引物設(shè)計(jì)有問題，建議設(shè)計(jì)完成后使用UCSC進(jìn)行電子PCR檢測是否有非特異性擴(kuò)增，或者進(jìn)行梯度PCR優(yōu)化退火溫度； Q2：Actin亮的原因有幾個(gè)：一是模板量較大（或者其中含有的actin較多）；二是PCR循環(huán)數(shù)較大；三是電泳時(shí)上樣量太多； |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
竹在心間
3樓2016-09-18 23:59:01
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2樓2016-09-18 23:52:11
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4樓2016-09-19 00:10:45
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5樓2016-09-19 06:13:27
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6樓2016-09-19 08:13:35
7樓2016-09-19 08:37:18
8樓2016-09-19 13:10:21
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估計(jì)要重新設(shè)計(jì)引物了吧，還有就是你要確定你設(shè)計(jì)引物用的那個(gè)序列和你的這個(gè)模版是匹配的。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
9樓2016-09-20 08:43:19
首先要謝謝你！ 我已經(jīng)驗(yàn)證過是匹配的了，而且在 NCBI上 blast過了引物是特異性的…我今天又做了個(gè)梯度再看看吧發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-09-20 10:47:48
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