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123144859_22新蟲 (初入文壇)
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[求助]
豬皮膠原的分型
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各位大俠,我是從豬皮中提取膠原,因?yàn)橐玫絀型膠原,我按照文獻(xiàn)中的方法,用0.1M的NaOH和10%的正丁醇去除雜蛋白和脂肪后,加入胃蛋白酶酶溶,提取出來的膠原經(jīng)離心、鹽析、透析和冷凍干燥后,得到白色海綿狀的膠原海綿;接下去我按照資料中的方法,將海綿溶解到0.05M中的醋酸中,加入1.6M的NaCl后,有蛋白析出(1),放置一天,離心,取上清液,再加入NaCl的時(shí)候就沒有蛋白析出了。 也就是我分型不成功,失敗了。 各位大俠能幫我看看我哪里出現(xiàn)問題了嗎?按照文獻(xiàn)中的方法,NaCl為1.6M時(shí),析出的應(yīng)該為Ⅲ型膠原,為2M時(shí),析出的為Ⅳ型膠原;2.6M時(shí),析出的為I型膠原, 可是我第二步的時(shí)候就沒有膠原析出了。 在做實(shí)驗(yàn)的過程中,我感覺第一步離心的時(shí)候,上清液就很清,沒有膠原溶液那種粘稠的感覺了,沉淀的量也跟我加入的量差不多了,感覺膠原在第一步全部析出了。 我只有這么多金幣了,麻煩各位大俠幫忙了,謝謝 |
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