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苓寧988新蟲 (小有名氣)
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[求助]
真核表達 已有1人參與
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克隆病毒的某個非結(jié)構(gòu)蛋白后做真核表達，一直不順利！這是我最近連接pCAGGS后的一個重組質(zhì)粒，酶切和測序都正確，轉(zhuǎn)染293T細胞后做的IFA，標(biāo)簽是Flag，但是不明白為什么我的蛋白表達看著不是在細胞質(zhì)，而且感覺這么不太正常呢？明年要畢業(yè)了，實驗還是不順利，急死了，希望大神指導(dǎo)，謝謝！ 4ug-4.jpg |
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-09-21 22:49:01
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-09-21 22:49:01
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光定位還有其他么？你用標(biāo)簽抗體免疫熒光？我一般目的蛋白抗體做，不知道有沒有差異，就算你裂解細胞做wb，flag一抗還是拉下很多雜帶，感覺不太可信 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2016-09-21 22:45:50
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2樓2016-09-20 14:23:26
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3樓2016-09-20 14:40:43
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4樓2016-09-20 14:54:23
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5樓2016-09-21 08:34:47
6樓2016-09-21 22:29:55
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8樓2016-09-22 10:02:47
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我現(xiàn)在想先確定這個蛋白能否表達成功，然后再進行蛋白互作實驗?zāi)兀詣e的數(shù)據(jù)基本沒有。有個情況就是，我的這個基因連接到pCAGGSS上加大轉(zhuǎn)染劑量能觀察到上圖結(jié)果，但是換個基因（相同病毒的另外的非結(jié)構(gòu)蛋白基因）轉(zhuǎn)染，IFA結(jié)果還不如上圖，甚至就直接沒有。期間也換過pEGFP-C1載體（重組質(zhì)粒測序、酶切都對），但是結(jié)果還是不行，不知道怎么回事？ 還有一個問題是，別人轉(zhuǎn)染后觀察細胞都能看到質(zhì)粒和脂質(zhì)體的混合物（小點樣的東西），但我的轉(zhuǎn)染后卻觀察不到，這種情況是不是會直接影響了轉(zhuǎn)染，導(dǎo)致質(zhì)�；揪蜎]有進入細胞�。� |
9樓2016-09-22 10:10:56
匿名
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10樓2016-09-22 22:08:13
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