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wjqfeixiang木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助各位大神有知道shuttle這個(gè)骨架的載體在哪里可以查到么？謝謝各位大神
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鄙人新手，入門一年半，手上得到一研究所的饋贈(zèng)得到pCMV-Cre質(zhì)粒�？梢詫re/loxP導(dǎo)入到系統(tǒng)中達(dá)到基因重組的目的。 但是由于這個(gè)質(zhì)粒做出來(lái)時(shí)間已經(jīng)有些久了，所以研究所導(dǎo)師不能準(zhǔn)確提供他的序列。 只知道這個(gè)Cre是以shuttle為骨架構(gòu)建的。現(xiàn)在我不知道這個(gè)shuttle骨架分很多種嗎？有什么方法可以查到么？能否查到它的單酶切位點(diǎn)可以簡(jiǎn)單做初步的驗(yàn)證。 主要的原因是因?yàn)槲以谟眠@個(gè)質(zhì)粒的時(shí)候，很多很基本的地方出現(xiàn)了問(wèn)題。比如它是卡那抗性的，我提取endo-free質(zhì)粒的時(shí)候濃度總是很低。一般都10到20ng/ul這樣。 現(xiàn)在將以前保種的有內(nèi)毒素的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，發(fā)現(xiàn)并不能形成菌落。保種的菌可以形成。但是仍舊endo-free的盒子提不出來(lái)。我懷疑可能之前保種挑去的單克隆是存在問(wèn)題的。 請(qǐng)問(wèn)shuttle的骨架分很多種嗎？有什么方法可以查到么？能否查到它的單酶切位點(diǎn)可以簡(jiǎn)單做初步的驗(yàn)證。 謝謝各位大神，祝您身體健康。  |
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