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[交流]
求問各位SSR和PAGE電泳以及相關(guān)PCR反應(yīng)的一些問題！！~么么噠 已有8人參與
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本人在做SSR和遺傳 多樣性的實(shí)驗(yàn)，這是8%的非變性page，電壓170V跑的。之后銀染色 有很多影子條帶導(dǎo)致不能區(qū)分目的條帶（最后是2000BP的marker雖然太大將就著用了），求問各位如何優(yōu)化pcr條件能夠去除影子帶。 ddH2O 17 rtaq 0.3 buffer（mg2+ free） 2.5 dNTP 1.2 MgCl2 1 F 1 R 1 基因組 1 IMG_2191.JPG |
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2樓2016-09-25 09:00:06
3樓2016-09-25 11:58:55
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4樓2016-09-25 12:13:28
memorize1991
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我本科畢業(yè)論文也做的SSR分子鑒定，植物的。也是25ul體系的，非變性和變性差不多。我用的6%的膠，1400V，設(shè)定的70mA，大概1.5h跑完。看你的應(yīng)該也做的64孔或者96孔的吧，個(gè)人觀點(diǎn)，1，你的體系中DNA量有點(diǎn)大，我不知道你到底有多少ng的DNA，這個(gè)也不能確定你加多了。2，你的膠都黃成這樣了，還有條帶都黑成這個(gè)樣，染色是一定過度了。我記得我好像是千分之二的硝酸銀，初次配的染色2到3分鐘就可以顯色，用過3到4次后，5分鐘左右顯色。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-09-25 15:27:35
6樓2016-09-25 15:32:35
7樓2016-09-25 22:27:20
8樓2016-09-25 22:32:10
9樓2016-09-25 23:35:55
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10樓2016-09-26 10:21:41
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