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machao8405木蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
5’RACE如何確定是否延伸到頭？ 已有1人參與
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| 最近正在做RACE打算拿到一個(gè)基因的全長(zhǎng)，3’RACE很好理解，延伸到poly-A尾巴即算是延伸到頭了，那么5’RACE怎么來(lái)確定拿到的結(jié)果是否延伸徹底，我根據(jù)3’和5’結(jié)果取和同源性較高的物種進(jìn)行比對(duì)，有4個(gè)基因都是5’端有或多或少的缺失，長(zhǎng)得能有好幾百bp，請(qǐng)教該如何判斷5’端是否延伸完全 |
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2樓2016-09-27 22:55:31
黃小燥
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| 你好樓主，我想向你請(qǐng)教一下RACE的問(wèn)題，希望你能指導(dǎo)一下！我菌種是真菌，由于我要的基因全長(zhǎng)序列在NCBI上沒(méi)有報(bào)道，所以我首先通過(guò)其他菌種的氨基酸序列比對(duì)，找到保守序列后用簡(jiǎn)并引物P出了一段序列，通過(guò)blast比對(duì)是我的目的基因片段，之后我再用類似方法一直P不出來(lái)了。而且我一直是用DNA為模板的，所以我在考慮是不是方法一開(kāi)始就錯(cuò)了。我想請(qǐng)教一下，通過(guò)我現(xiàn)在得到的這部分序列能否得到基因全長(zhǎng)，要用什么方法。因?yàn)槭欠硼B(yǎng)碩士，所以也沒(méi)有人能給指導(dǎo)，我看了相關(guān)的文獻(xiàn)，所以在考慮是否能用RACE來(lái)解決。 |
3樓2017-02-17 11:14:42
4樓2017-02-17 12:54:07
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