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小李紙11銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
畢赤酵母表達(dá)
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| 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母之前進(jìn)行線性化，酶切后的產(chǎn)物需要純化嗎？轉(zhuǎn)化前還需要對酶切產(chǎn)物進(jìn)行特殊處理嗎？如果純化的話，洗脫液會不會對轉(zhuǎn)化有影響？ |
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰·手有余香，謝謝你的理解與支持。祝您科研順利，文章多多。 2016-09-29 14:59:54
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單酶切后要純化，洗脫用雙蒸水，轉(zhuǎn)化前調(diào)整好總體積，確保plasmid質(zhì)量足夠，其實很好轉(zhuǎn)，但實驗周期太長 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
小李紙112樓2016-09-29 14:14:10
小李紙11
銀蟲 (正式寫手)
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3樓2016-09-29 16:54:38
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如果你是用biorad的電轉(zhuǎn)染儀器的話，里面是有預(yù)設(shè)畢赤的程序的，我一開始是用最老式的eppendorf電轉(zhuǎn)儀，里面就只能調(diào)電壓，一般調(diào)2000-2200v吧，停留時間是因你做的感受態(tài)好壞而定的，畢赤酵母推薦在5毫秒左右，轉(zhuǎn)完之后我是直接涂Ypds平板篩選抗性基因，這當(dāng)然有點運(yùn)氣成分，畢竟酵母的假陽性比較高，不過電轉(zhuǎn)做得好沒問題，至于Mm，md應(yīng)該是篩選甲醇敏感型之類的吧，反正我沒用過 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2016-09-29 23:21:18
小李紙11
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5樓2016-10-03 10:11:56
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