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d532886741新蟲 (初入文壇)
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[交流]
瓊脂糖電泳
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請問這樣的膠圖效果是怎么樣跑出來的呀、我們自己跑出來的膠背景都好臟；另外之前有人跟我說過把染色劑點(diǎn)到樣品里面混合loading buffer，我自己做的時候怎么什么都看不到呀？ K_$[C}O)4QYCD0L{~(R~VCU.png |
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| 祝福 |
2樓2016-10-08 21:28:40
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首先是做膠要做好，瓊脂糖要完全溶解混勻，制膠板干凈。其次是拍照曝光可調(diào)一下。一般都會很漂亮的，除非你樣品有問題。買的熒光染料直接混在 loading buffer里是可以的，使用方法看你購買的說明書 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-10-09 03:33:57
?(?^o^?)?兜
新蟲 (初入文壇)
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背景亂膠沒完全溶解， 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-10-09 14:53:28
5樓2016-10-11 10:09:41
still2008
至尊木蟲 (著名寫手)
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膠沒融好，溫度和時間長一些，倒膠的溫度不要太低了，倒膠的速度快一些。應(yīng)該就沒事了。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2016-10-11 12:06:14
匿名
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7樓2016-10-12 16:26:01
chen5805
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8樓2016-10-12 16:43:27
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跑出來的膠背景都好臟，不關(guān)是否把染色劑點(diǎn)到樣品里面混合loading buffer。操作過程要注意以下幾點(diǎn)： 1.首先保證所提的蛋白是符合要求的，樣品處理過程是否嚴(yán)格按照方法步驟，相關(guān)試劑盡量精密滴加等。 2.膠的制備方面，制膠的有些試劑是需要負(fù)20度保存，避光等等，玻璃板之類的要干凈，加完試劑要充分混勻。保證膠的質(zhì)量。 3.電泳的試劑，電壓或電流條件，轉(zhuǎn)膜的操作等等都要注意�！� 4.抗體的孵育過程，洗膜的過程都要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行。（一般封閉，洗膜，孵育抗體等都很影響膠的顯影背景） western bloting 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響因素很多，一開始嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作步驟，耐心重復(fù)，會積累好多經(jīng)驗(yàn)。 |
9樓2016-10-12 16:46:18
10樓2016-10-12 23:43:34
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