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zeyuanzi新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求感受態(tài)細(xì)胞制備的標(biāo)準(zhǔn)步驟 已有1人參與
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如題，制備感受態(tài)一直失敗，氯化鈣濃度0.05還是0.1,簡(jiǎn)單滅菌嗎，還有什么需要注意的，求大神介紹一下，感激不盡 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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zeyuanzi
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3樓2016-10-11 11:34:00
010308Jing
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2樓2016-10-11 10:59:08
zeyuanzi
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xn8008: 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-11 13:33:10
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或許很簡(jiǎn)單，但有什么需要注意的點(diǎn)嗎，去轉(zhuǎn)數(shù)，時(shí)間，OD值 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-10-11 11:35:00
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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大腸桿菌DH5α/M15感受態(tài)細(xì)胞的制備(CaCl2法) 1) 將大腸桿菌接種于20mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩(200rpm左右)過夜(12h左右)培養(yǎng)(至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期)； 2) 將1mL 過夜培養(yǎng)的菌液移入50mL LB液體培養(yǎng)基(一般為1：50的比例)中，37℃振蕩培養(yǎng)至OD600為0.5-0.6，放于冰上30min； 3) 取1mL菌液于1.5mL無(wú)菌eppendorf管中，4℃，4000rpm 離心10min，去上清； 4) 沉淀用1mL預(yù)冷的0.1mol.L-1 CaCl2懸浮，用槍頭輕輕吹打混勻，于冰上放置30min； 5) 4℃，4000rpm 離心10min，去上清，沉淀再加200μl的0.1 mol.L-1 CaCl2重懸，冰上放置2-7h后，用于轉(zhuǎn)化；或每管加20-30%的滅菌甘油，混勻，－70℃保存。 注意：要無(wú)菌操作，感受態(tài)始終要低溫 |
5樓2016-10-11 13:42:39
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