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heck金蟲 (正式寫手)
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【資源】提取懸浮細(xì)胞RNA
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【資源】提取懸浮細(xì)胞RNA 提取RNA 器械：離心管2支，吸管4個(gè)，酒精燈，打火機(jī)，記號筆，200ul,1000UL槍，DEPC泡過的槍頭EP管，紫外照過的手套。濾紙，DEPC純水（750ml無水乙醇＋150mlDEPC水,劇烈振蕩，使勁的搖晃，直至混勻），氯仿，75％酒精，異丙醇，Trizol，預(yù)冷的離心機(jī)（兩種），EP管架（洗液擦洗） 過程： 1. 取細(xì)胞懸液，室溫下離心，1000rmp/min,6min,棄上清（此時(shí)可預(yù)冷另一個(gè)離心機(jī)） 2. 帶手套，加Trizol 1ml/5-10*10(6)個(gè)，反復(fù)吹打，溶解均勻細(xì)胞（輕吸，不要倒吸倒棉花上，初次就選用大的吸管） 3. 帶雙層手套，混合好的樣品全部移置到0.1ml的EP管中，室溫15－30度靜置5分鐘 4. 加入0.2ml氯仿/1mlTrizol,蓋好EP管，劇烈振蕩（上下顛倒），15秒鐘，室溫靜置2－3min 5. 2－8度，離心，10500rpm/min，15min,取上清，用200ul在20ul刻度使用，小心不要使界面混淆，剩余界面上不要） 6. 上清中加入等量的異丙醇(一般是0.5:1),顛倒5次（用200ul槍加小心），室溫靜置10min 7. 2-8度離心，10500rmp/min,10min,棄上清 8. RNA洗滌：75％酒精（這次用的100％。未影響）1ml沉淀，輕輕彈其底部（直接放入－70度冰箱可以長期保存，靜置幾秒鐘 9． 2－8度離心，8500rpm/min,5min ,棄上清 10． 取出濾紙，將EP管敞開放在濾紙上，管口向酒精燈（不要完全干燥，不好溶解） 11. DEPC水溶解（30ul,可變），分裝,2ul電泳，2ul比色，其余5ul分裝至于手套中凍于－20度中 |
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