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腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)血管生成模型實驗 已有1人參與
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腫瘤細(xì)胞實質(zhì)就是腫瘤。腫瘤組織由實質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，腫瘤實質(zhì)是腫瘤細(xì)胞，是腫瘤的主要成分，具有組織來源特異性。它決定腫瘤的生物學(xué)特點以及每種腫瘤的特殊性。 實驗方法原理 無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長直徑超過1~2 mm，都會有血管生成。這是由于腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長因子，誘導(dǎo)血管生成。 實驗材料 腫瘤細(xì)胞 試劑、試劑盒 DEM、藻酸鈉、NaCl、EDTA、CaCl2、臺盼藍(lán)、甲醛 儀器、耗材 離心機、分光光度計、γ計數(shù)儀 實驗步驟 1. 用DEM培養(yǎng)液洗滌對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，收集并重新懸浮細(xì)胞于DEM培養(yǎng)液中。 2. 懸浮的腫瘤細(xì)胞與1.2%藻酸鈉溶液混合，稀釋后的藻酸鈉濃度為0.8%，細(xì)胞濃度為（1~5）×106細(xì)胞/ml。 3. 把0.8%藻酸鈉的腫瘤細(xì)胞稀釋液裝入噴霧器內(nèi)，用力使液體壓出噴嘴。 4. 當(dāng)水溶性的藻酸鈉與80 mmol/l CaCl2混合，Na+被Ca2+取代后變成膠。 5. 空氣壓力和噴出的速度決定藻酸鈉膠粒的大小，可用培養(yǎng)液或0.15 mol/ NaCl漂洗膠粒。 6. 加入0.5 ml含有1%EDTA的0.9%NaCl溶液至0.5 ml 藻酸鈉包埋的細(xì)胞中。 7. EDTA能破壞Ca2+與藻酸的結(jié)合鍵，使膠轉(zhuǎn)變成液體。 8. 臺盼藍(lán)測定腫瘤細(xì)胞。 9. 用50%的藻酸鈉溶液稀釋包埋細(xì)胞，以便在恒定體積內(nèi)得到所需的腫瘤細(xì)胞數(shù)。 10. 用21號針沿腹白線皮下注射200 ul 藻酸鈉溶液包埋的腫瘤細(xì)胞，以藻酸鈉溶液作為對照。 11. 3~21天后，處死動物，從腹部皮下分離出藻酸鹽膠粒： （1）10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片，染色，進(jìn)行組織化學(xué)和免疫化學(xué)檢查。 （2）諸葛將其稱重，于室溫下載水中浸泡、搖動過夜，采用Drabkin’s分析方法在分光光度計540 nm 測定上清液中的血紅蛋白含量。 （3）在處死動物前1 h，把51Cr標(biāo)記的紅細(xì)胞從尾靜脈注射至小鼠體內(nèi)。 （4）拉頸處死小鼠后，將分離出的藻酸鈉膠粒和遠(yuǎn)離膠粒的一塊組織稱重，并用γ計數(shù)儀測定放射性。 |
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