 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4040 | 回復(fù): 12 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
lzhwin木蟲 (正式寫手)
|
[交流]
請(qǐng)教用PVDF膜做western的朋友 已有5人參與
|
||
|
近來開始學(xué)做western，沒想到居然會(huì)卡到轉(zhuǎn)膜這一步。 我用的是PVDF膜，開始幾次怎么都轉(zhuǎn)不出來原因分析如下： 前兩次認(rèn)為是沒有事先用純甲醇浸泡，結(jié)果立春紅S染色空無一物，而且濾紙剪的太大懷疑短路了 第三次PVDF在甲醇里泡了15秒，然后又在含20%甲醇的轉(zhuǎn)膜液中泡了至少10分鐘，濾紙比膜小、膜比膠3小。結(jié)果立春紅還是什么都沒染出來。 第四次換用NC膜，正常轉(zhuǎn)膜、膜比膠稍大一點(diǎn)、濾紙比膜小，染出了條帶 第五次PVDF在甲醇里泡了3分鐘，轉(zhuǎn)膜液里至少15分鐘，轉(zhuǎn)完仍然什么都染不出來，絕望下又在甲醇里泡了1分鐘，再染色，出了條帶。 第六次條件基本同第五次，只是轉(zhuǎn)膜時(shí)間比第五次長了一個(gè)小時(shí)（中間吃飯去了），結(jié)果卻重復(fù)不出第五次的結(jié)果，繼續(xù)向下作ECL顯色也沒有壓出條帶。 真是快瘋了，為什么在我這里PVDF膜這么難伺候，不都說PVDF膜比NC膜貴也比NC膜好嗎？為什么我連轉(zhuǎn)膜這事情都搞不定？大家救救我吧！ PS：轉(zhuǎn)膜是正負(fù)極絕對(duì)沒有搞錯(cuò) 沒有條帶的意思是什么都沒有，包括marker以及各種高豐度蛋白，統(tǒng)統(tǒng)沒有 轉(zhuǎn)膜的條件是200mA恒流1小時(shí)（加冰盒降溫），當(dāng)然具體操作起來時(shí)間會(huì)有點(diǎn)出入�？床坏胶懔鲿r(shí)的電壓值。 后面幾次轉(zhuǎn)過膜的凝膠都重新做過考馬斯亮藍(lán)染色，凝膠上已經(jīng)看不到條帶。 個(gè)人認(rèn)為膜上什么都沒有肯定是關(guān)鍵步驟出了問題，但是到底是哪里呢？郁悶的是我染成功過現(xiàn)在卻重復(fù)不了了，長一個(gè)小時(shí)應(yīng)該不會(huì)讓蛋白全部穿過PVDF膜吧？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
【求調(diào)劑】新能源材料本科，一志愿211，初試321
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
336求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料工程322分
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料考研調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
生物學(xué)308分求調(diào)劑（一志愿華東師大）
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
求生物學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
08生物與醫(yī)藥專碩初試346找調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
生物學(xué)327，求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 將透明薄膜做成白色膜。。。。請(qǐng)教各位
已經(jīng)有29人回復(fù)
- PVDF膜在水中浸泡后，水中會(huì)生成一些白色絮狀的膜，請(qǐng)教下
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 怎樣給PVDF膜親水改性��？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 請(qǐng)教大家用作壓電的PVDF在哪能買到？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- PVDF膜 的曝光問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【交流】請(qǐng)問PVDF膜，NC膜，以及尼龍膜他們的透明液分別是什么
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】western的pvdf膜和NC膜有什么區(qū)別？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒條帶，why？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【交流】PVDF成膜問題
已經(jīng)有79人回復(fù)
- western blot 半干轉(zhuǎn)膜后，發(fā)現(xiàn)條帶個(gè)別缺失，不知道什么原因，請(qǐng)教各位
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 【請(qǐng)教】怎樣做石墨烯紙或膜？
已經(jīng)有50人回復(fù)
- 【求助】請(qǐng)教PVDF有機(jī)濾膜與PVDF生物轉(zhuǎn)印膜的區(qū)別？
已經(jīng)有5人回復(fù)
wangjiasi
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2382.9
- 散金: 120
- 紅花: 4
- 帖子: 346
- 在線: 737.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 450308
- 注冊(cè): 2007-11-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
4樓2008-12-01 00:06:19
ZOU0000
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 15534.9
- 紅花: 2
- 帖子: 1322
- 在線: 111.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 440812
- 注冊(cè): 2007-10-27
- 專業(yè): 環(huán)境化學(xué)
2樓2008-11-27 20:09:28
lzhwin
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 1977.1
- 散金: 3
- 紅花: 2
- 帖子: 489
- 在線: 58.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 481076
- 注冊(cè): 2007-12-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
3樓2008-11-27 21:53:05
shadowfly
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6876.7
- 帖子: 292
- 在線: 66.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 101800
- 注冊(cè): 2005-11-13
- 專業(yè): 微生物學(xué)
5樓2008-12-01 11:40:39
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +5 | Gs大王 2026-04-02 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +12 | A_JiXing 2026-04-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海海洋大學(xué)083200食品學(xué)碩，求調(diào)劑，接受其他專業(yè) +5 | what張 2026-04-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥 初試274求調(diào)劑 +5 | 小叮當(dāng)來了 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
chinese chemical letters英文版投稿求助
 120+4
|
Yishengeryi 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +11 | Amber00 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 070300求調(diào)劑306分 +5 | 26要上岸 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +10 | @taotao 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 土木304求調(diào)劑 +3 | 兔突突突， 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 土木304求調(diào)劑 +5 | 頂級(jí)擦擦 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 已決定調(diào)劑院校 +8 | JKSOIID 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +13 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 083000學(xué)碩274求調(diào)劑 +12 | Li李魚 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 福建理工大學(xué)材料學(xué)院先進(jìn)合金團(tuán)隊(duì)招收考研調(diào)劑學(xué)生 +3 | 大華金商都 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[有機(jī)交流]
 甲基亞磺磺酸鈉和甲基磺酸酯反應(yīng)機(jī)理
10+3
|
kaobao456 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +7 | DLkz1314. 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 11408總分309，一志愿東南大學(xué)求調(diào)劑，不挑專業(yè) +5 | 天賦帶到THU 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 071010 323 分求調(diào)劑 +3 | Baekzhy 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|