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荒唐的硬幣金蟲 (小有名氣)
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[求助]
RT-PCR得不到完整的cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物
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情況是這樣的，我目前在從mRNA擴(kuò)增自己的目的基因（2.2K）。mRNA分別來自葉片和花芽。 最開始，用Oligo（dT）+Random引物做了反轉(zhuǎn)錄，之后用一對(duì)引物擴(kuò)增cDNA，拿基因組DNA做陽(yáng)性對(duì)照，上游引物在5‘端，下游引物在3’端，瓊脂糖電泳，結(jié)果陽(yáng)性對(duì)照有目的條帶，我的cDNA都沒有結(jié)果。 后來，設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物打算分兩段擴(kuò)增cDNA，瓊脂糖電泳，結(jié)果對(duì)于兩對(duì)引物，陽(yáng)性對(duì)照有目的條帶。而我的cDNA，只有后半段（靠近3‘端）有目的條帶，前半段（靠近5’端）始終擴(kuò)增不出來。 求助大神，有沒有可能mRNA前半段并不存在？或者說反轉(zhuǎn)錄并沒有得到完整的cDNA？ |
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