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[求助]
瓊脂糖凝膠電泳總是丑，愁死個(gè)人，求助！ 已有8人參與
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實(shí)驗(yàn)做得挺久的，可是瓊脂糖凝膠電泳跑得一直很丑，最近膠回收總是出丑圖，位置還不準(zhǔn)，真是受不了了，來請(qǐng)教！ 1.我是在loading buffer（50% 甘油，EDTA 1% 溴酚藍(lán)，5 mM EDTA ）里加 1%Gel red ,上樣時(shí)5微升Loading buffer+50毫升 PCR產(chǎn)物，點(diǎn)樣孔幾乎溢出。 2.BioRAD 電源、電泳槽（�。�，電壓100V，跑半小時(shí)，溴酚藍(lán)到膠塊中間。 最近PCR產(chǎn)物膠回收的圖，溴酚藍(lán)帶、目的條帶都擠在一起了，位置根本不準(zhǔn)，好生氣。小孔點(diǎn)5微升位置正常。 從前正常一點(diǎn)的，酶切產(chǎn)物膠回收?qǐng)D，我覺得還好呢。 我自己的推測(cè)： 1. 上樣量過大？loading buffer量不合適？ 2.制膠不均勻？我都是沸騰兩次才倒膠的。 求助~~ |
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以我多年跑圖經(jīng)驗(yàn) ，應(yīng)該就是制膠不均勻，溶膠時(shí)你在正常比例上多加10 ml TAE，然后溶2分鐘，在旁邊看著注意不要溢出。這樣跑的圖絕對(duì)美美噠 |
4樓2016-10-26 15:26:48
論壇小蟲蟲
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你的膠有問題吧，你可以每次多配一些膠，然后放在60度左右的孵箱里面保存，這樣就不用每次都配了，然后用的時(shí)候拿出來搖一搖再倒膠，然后加樣不要太多，最好不要溢出來，跑膠時(shí)間也不用那么長，15min就差不多夠了，注意調(diào)整好電壓 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
29樓2016-10-27 23:43:54
shanyue00
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38樓2016-10-28 22:38:37
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稍微多放電解液，加熱到澄清后加染料，趕掉氣泡，點(diǎn)樣不要太多，溢出去的話也會(huì)不好看的 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2016-10-26 15:40:54
WilliamHJ
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12樓2016-10-27 08:52:58
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14樓2016-10-27 13:54:54
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把電泳液換成新的，降低上樣量，這種孔一般30uL就可以了，如果想多上樣可以換用切膠回收的大孔或用透明膠帶把挨著的幾個(gè)孔連起來，最后，膠要煮的澄清透亮似清水，時(shí)間可以根據(jù)膠的變化定，不一定1min， 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
15樓2016-10-27 14:49:11
匿名
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我們一般膠濃度0.8%-1%,biowest 0.32-0.4g,40ml 1×TAE ,微波爐加熱，中火，2分鐘，也就沸騰了，放到60度吧，加染料，混勻后，就直接制膠了，一般不會(huì)很厚，我習(xí)慣放那半小時(shí)以后，再去跑膠。加樣是6微升loading buffer ，4微升樣，122V,13-16分鐘，跑出來的膠效果很好。以上給你做下參考。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
25樓2016-10-27 21:47:24
匿名
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