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NCBI還能設(shè)計q-PCR引物？！是的！ 已有2人參與
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今天有小伙伴問小編怎么設(shè)計q-PCR的引物？于是乎，就有了這個熱噴噴的帖子了，大家快來，干貨拿走！平時大家都用AlleID6.0來設(shè)計引物，但是有時候會因為電腦系統(tǒng)不兼容的問題而沒法設(shè)計引物。所以用這種方法來彌補(bǔ)這個缺點(diǎn)。第一步當(dāng)然是進(jìn)入NCBI主頁了哦，選擇基因，現(xiàn)在以ct2這個基因為例給大家講解。 下一步，選擇第一個有關(guān)擬南芥的基因進(jìn)去如下界面：  我們選擇NM_106232.3，NM的含義是Number of mRNA，之后點(diǎn)擊進(jìn)去：   看到在界面的左側(cè)有個Analyze this sequence下面有個Pick primers的選項卡，點(diǎn)擊進(jìn)去：  在框里會自動生成mRNA的序列號或者手動粘貼序列，調(diào)節(jié)產(chǎn)物大小值（qPCR一般在100-200之間），退火溫度等等。在下面Exon/intron selection選項里，一般選擇no proference,第二個選項Primer must span an exon-exon junction的意思是產(chǎn)物跨越兩個外顯子，第三個意思是產(chǎn)物不跨外顯子。  點(diǎn)擊get primer：  上面紅色的一段就是DNA序列，下面黑色一段一段的是外顯子，藍(lán)色的就是pcr產(chǎn)物了，根據(jù)自己的需求就可以選擇相應(yīng)的引物了�？傊�(dāng)用軟件無法滿足自己的需求時，可以選擇這種方法來設(shè)計引物。祝大家實(shí)驗順利！ 本文轉(zhuǎn)載自川農(nóng)CNS閱讀吧，作者ID：請叫我何博 |
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2樓2017-05-08 09:29:11
DearDLing
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 144.3
- 帖子: 15
- 在線: 3.7小時
- 蟲號: 7438279
- 注冊: 2017-11-07
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2017-11-16 19:14:48
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