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重疊延伸PCR 已有2人參與
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重疊延伸PCR技術(shù)（gene splicing by overlap extension PCR，簡(jiǎn)稱SOE PCR）由于采用具有互補(bǔ)末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈，從而在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸，將不同來(lái)源的擴(kuò)增片段重疊拼接起來(lái)。 實(shí)驗(yàn)方法原理 此技術(shù)利用PCR技術(shù)能夠在體外進(jìn)行有效的基因重組，而且不需要內(nèi)切酶消化和連接酶處理，可利用這一技術(shù)很快獲得其它依靠限制性內(nèi)切酶消化的方法難以得到的產(chǎn)物。重疊延伸PCR技術(shù)成功的關(guān)鍵是重疊互補(bǔ)引物的設(shè)計(jì)。重疊延伸PCR在基因的定點(diǎn)突變、融合基因的構(gòu)建、長(zhǎng)片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴(kuò)增等方面有其廣泛而獨(dú)特的應(yīng)用。 實(shí)驗(yàn)材料 基因樣品 儀器、耗材 PCR儀 實(shí)驗(yàn)步驟 1. 以引物a/b進(jìn)行pcr1。 2. 以引物c/d進(jìn)行pcr2。 3. 引物b/c中引入了需要的限制性位點(diǎn)。 4. 混合二者pcr產(chǎn)物，混合以前最好回收一下。 5. 進(jìn)行pcr延伸反應(yīng)，只有右面這個(gè)可以延伸。 6. 以延伸反應(yīng)的產(chǎn)物為模板，以a/d為引物進(jìn)行pcr。 7. 產(chǎn)物即為所需最終產(chǎn)物。 |
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2樓2016-11-01 18:50:37
清嗓金聲 
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2016-11-28 10:37:19
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