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gdm_1988新蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌BL21高密度發(fā)酵表達小分子蛋白表達量低
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各位蟲友好:最近在做大腸桿菌高密度發(fā)酵表達小分子蛋白（蛋白大小6-7KD），表達蛋白為包涵體，表達量低，誘導前菌體生長較好，誘導6-9h后，濕重和ＯＤ不變，SDS-PAGE蛋白純度下降，質(zhì)粒穩(wěn)定性也明顯下降，蛋白純度只有20%左右，但是搖瓶表達一般能達到40% ，不知道大家有沒有遇到這種情況？還請高手指教 |
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 高密度發(fā)酵 |
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我記得養(yǎng)酵母的時候需要溶氧比較高，細菌用那么高的溶氧嗎？這個我不太清楚，你可以查一查文獻。我們實驗室之前做的也是，小瓶比罐穩(wěn)定，罐子就是特別麻煩，需要摸索發(fā)酵條件，摸索好了條件就可以發(fā)一篇文章了。而且還要注意，你的罐子的傳感器是否準確，有沒有校準過。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
6樓2016-11-06 20:01:03
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你的DO控制沒有問題。營養(yǎng)分配:留一半營養(yǎng)到誘導后補料。誘導點設(shè)置:如果你的培養(yǎng)基能支持長到OD達到80，你就20左在開始誘導。誘導劑用量:誘導劑用量要適量高一些，比如高于0.5mM。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-11-06 20:30:52
ganchao1776
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玉米漿很適合BL21(DE3)發(fā)酵，而且有增強質(zhì)粒穩(wěn)定性的作用，你可以先用0.5%的玉米漿配個培養(yǎng)基試一下，注意滅菌前pH調(diào)到7以上。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-11-06 20:36:18
gdm_1988
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9樓2016-11-12 14:58:25
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