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瑞兒f新蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白純化小白，請教硫酸銨沉淀純化及tris問題！ 已有3人參與
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看了很多同學用硫酸銨沉淀純化蛋白。 我嘗試做預(yù)實驗，梯度沉淀蛋白，在4度沉淀30分鐘，透析攪拌透析1小時，透析袋1kDa，我知道不對，時間太短了，但是預(yù)實驗就這么嘗試一下，結(jié)果就是鹽沒除掉。 這里面有幾個問題，1沉淀蛋白時間參考文獻就可以吧，沒必要透析過夜是嘛？2透析袋分子量會不會太��？換一個3千的能好一點對嘛？3一般透析要過夜才能除干凈硫酸銨嘛？4看有同學用緩沖鹽溶液tris.HCI透析，是不是就是為了控制ph呢？5純化的蛋白一般用tris緩沖鹽溶解，為什么要選擇tris呢？最后跑電泳不用去除么？ 各位高手們指點一下嘛，因為是最基本的問題，做不好也沒辦法開展下面的實驗。本人是做制劑的，實驗室也沒有做蛋白的，所以自己撞頭比較嚴重，跪謝大家的指導(dǎo)。感激不盡 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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