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把細(xì)胞鋪勻的7個(gè)小技巧 已有2人參與
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做cell biology實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪板大概是最常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了。但是有很多人不是很得要領(lǐng)，鋪得不是均勻： 要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。以下是我的一些技巧，希望可以幫助到大家。 1.一般96孔板我每孔是加100微升細(xì)胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細(xì)胞懸液混一下再，繼續(xù)加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好），依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。 6孔板12孔板或24孔板，我均采用將第一個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔一次類推，這樣整個(gè)孔底都是濕潤的，細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底，加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多，而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有96孔板好掌握，效果沒有96孔板好，所以我放棄改用浸潤孔底的方法。 2.細(xì)胞懸液加完后，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊，使之分散。 3.如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話，我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下，效果不錯(cuò)，就是振幅小，頻率高的那種。 4.細(xì)胞要盡量打散，大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后，要充分懸浮！還有轉(zhuǎn)移到六孔板后，是要晃得！晃的時(shí)候最好不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈，不然細(xì)胞就全被帶到中間去了，就會(huì)不均勻！ 5.一瓶細(xì)胞長滿后，正常處理，在培養(yǎng)瓶里吹勻，然后鋪6孔板，每孔2毫升，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭，然后放到培養(yǎng)箱里，輕微的左三圈右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小時(shí)之后觀察 每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻。 6.計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量，混勻后，加到六孔板里，六孔板按橫8字型晃，顯微鏡下觀察，如果不均勻，按上述方法再晃。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話，在種六孔板的過程中，隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子，瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈。 7.放在水平板面上先上下移動(dòng)，再左右移動(dòng)，每個(gè)方向５到６次，但關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養(yǎng)箱中，不要再做過多的運(yùn)動(dòng)，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了。 |
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