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xuchao7447木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
超
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[求助]
色譜柱再生 已有1人參與
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各位大神，本人實(shí)驗(yàn)室中有幾根日本TSK G2000SWxL凝膠色譜柱，每一根都是用了一段很短的時(shí)間后出峰就越來(lái)越難看，而且回收率也不高�，F(xiàn)在認(rèn)為是柱效下降，請(qǐng)問(wèn)各位大神這種分子排阻柱怎么再生比較好點(diǎn)。開(kāi)始用了高濃度的硫酸鹽、15%甲醇、0.1%醋酸的pH=4的磷酸鹽這三種流動(dòng)相沖洗，但是效果貌似并不怎么好。 |
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董明明1231
新蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2020-11-28 15:18:39
t892893235
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
范德姆特大對(duì)勾
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- 專(zhuān)業(yè): 色譜分析
【答案】應(yīng)助回帖
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硅膠基質(zhì)分子尺寸排阻色譜柱清洗方法（7.8x30cm） 1.100%純水以0.2mL/min的流速?zèng)_洗1.5小時(shí). 2.如果是疏水性吸附，以20%乙腈水溶液為流動(dòng)相（用0.45um的有機(jī)相濾膜過(guò)濾），采用0.2mL/min的流速?zèng)_洗1.5小時(shí). 3.100%純水以0.2mL/min的流速?zèng)_洗1.5小時(shí). 4.如果是離子性物質(zhì)的吸附，以0.1mol/LPB（0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4）緩沖液+0.1mol/LNa2SO4溶液為流動(dòng)相（用0.45um的水相濾膜過(guò)濾），采用0.2 mL/min的流速?zèng)_洗1.5小時(shí)后，再以0.01g/LPABA(對(duì)氨基苯甲酸)為標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)樣量為20uL,在UV280nm下，以0.1mol/LPB（0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4）緩沖液+0.1mol/LNa2SO4溶液為流動(dòng)相檢測(cè)柱效,。 5.如果是堿性物質(zhì)的吸附，以0.05mol/L的磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)整pH2.5流動(dòng)相（用0.45um的水相濾膜過(guò)濾），采用0.2mL/min的流速?zèng)_洗1.5小時(shí)。 6.如果上述處理后仍未能解決問(wèn)題可能是氫鍵的吸附，在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或者0.2%-0.3%的中性界面活性劑（Triton、Tween）（用0.45um的水相濾膜過(guò)濾）后以0.2mL/min的流速?zèng)_洗1.5小時(shí)。但需要注意尿素和表面活性劑會(huì)在柱中殘留。一般不建議此項(xiàng)操作。 7.沖洗完成后，使用0.1mol/LPB（0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4）緩沖液+0.1mol/LNa2SO4溶液為流動(dòng)相（0.45um水相濾膜過(guò)濾），0.01g/LPABA(對(duì)氨基苯甲酸)為標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)樣量為20uL,在280nm檢測(cè)柱效。 |
3樓2020-11-30 11:24:12
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