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Nigori

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[交流] 酶聯(lián)免疫吸附實驗

酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）可以：

（1）免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。

（2）研究抗酶抗體的合成。

（3）顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

（4）定量檢測體液中抗原或抗體成份。

實驗方法原理

雙抗體夾心法（測抗原）

本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進行測定，底物降解的量即為欲測抗原的量。

這種方法欲測的抗原必須有兩個可以與抗體結(jié)合的部位，因為其一端要包被于固相載體上的抗體作用，而另一端則要與酶標(biāo)記特異性抗體作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之類的抗原測定。我們用在霍亂腸毒素的測定。HbSAg及HbS的測定。

實驗材料 血清、血漿、體液

試劑、試劑盒碳酸鹽包被緩沖液、抗體球蛋白、吐溫、檸檬酸、硫酸

儀器、耗材酶標(biāo)比色計、96孔板、移液槍、離心管、離心管盒

一、包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度（1～10 μg /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱。

二、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。

三、每凹孔加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標(biāo)本，37℃作用1～2小時。

四、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。

五、加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體溶液，37℃作用1～2小時或由預(yù)試實驗確定作用時間。

六、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。

七、加入0.2ml底物溶液于每個凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 ml終止劑）。

八、加終止劑：每凹孔加2M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 ml。

九、觀察記錄結(jié)果：目測或用酶標(biāo)比色計測定（OPD用492nm）OD值。

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