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Yuanfang_818金蟲 (小有名氣)
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連接轉(zhuǎn)化 已有3人參與
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道友們，請(qǐng)教一個(gè)問題，做質(zhì)粒的重組實(shí)驗(yàn)，先將目的片段連入T載體，之后挑選序列正確的菌，提取質(zhì)粒后，雙酶切，得到三條長帶(1200,2200,2800)(因?yàn)門載體上有相同的酶切位點(diǎn))，其中2200是目的片段，1200和2800為T載體上的。電泳切膠后，切得2200bp片段膠回收，然后連接入表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化后，挑選陽性菌跑PCR。結(jié)果絕大多數(shù)條帶是1200，還有2800的，測(cè)序是T載體上的，而我的目的條帶卻很少有？求教為什么啊，重復(fù)過多次了�。�！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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是做連接的問題嗎，連接時(shí)20ul體系，質(zhì)�；厥债a(chǎn)物濃度50ng/ul，加入1ul，目的片段回收產(chǎn)物與質(zhì)粒濃度比3~5：1左右 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-11-14 20:18:54
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4樓2016-11-15 10:30:21
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【答案】應(yīng)助回帖
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是連接的問題吧，要不然就是回收的時(shí)候出現(xiàn)了問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-11-15 11:46:35
Yuanfang_818
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7樓2016-11-16 10:39:06
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8樓2016-11-16 14:03:47
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