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[求助]
去磷酸化 已有2人參與
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| 請(qǐng)問(wèn)體外表達(dá)的蛋白質(zhì)去磷酸化怎么做？實(shí)驗(yàn)室有CIP(小牛長(zhǎng)堿性磷酸酶)，可以用這個(gè)嗎？時(shí)間、溫度、反應(yīng)體系如何？ |
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7樓2018-08-31 16:47:53
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2樓2016-11-17 10:00:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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緣生來(lái)物: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2016-12-21 20:08:27
緣生來(lái)物: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2016-12-21 20:08:27
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可以用CIP，反應(yīng)溫度是37攝氏度，我一般處理時(shí)間是2小時(shí)左右，然后中間一直旋轉(zhuǎn)孵育。注意，加蛋白酶抑制劑會(huì)比較好。 我用的buffer終濃度是100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM dithiothreitol, pH 7.9。 樣品最好是IP下來(lái)或者純化后的，體系用50微升應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題。 你可以再查一下這篇文獻(xiàn)參考一下：Kornhauser, J. M., Cowan, C. W., Shaywitz, A. J., Dolmetsch, R. E., Griffith, E. C., Hu, L. S., Haddad, C., Xia, Z., and Greenberg, M. E. (2002) CREB transcriptional activity in neurons is regulated by multiple, calcium-specific phosphorylation events. Neuron 34, 221-233 |
3樓2016-11-24 20:20:32
4樓2016-12-21 21:46:30
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