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曉琦琦金蟲 (小有名氣)
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[求助]
擴(kuò)cDNA擴(kuò)不出來，擴(kuò)基因組能擴(kuò)出來是什么問題。
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第一幅圖是擴(kuò)增的cDNA，中間兩個(gè)高點(diǎn)的是內(nèi)參β-actin引物，剩下的沒有條帶的是基因A，有條帶的是基因B。第二幅圖擴(kuò)增的還是cDNA，有一個(gè)不到100bp的條帶是基因B的，不過位置不對，在mRNA上應(yīng)該是200bp，剩下的是沒擴(kuò)出來的基因A，目的條帶也應(yīng)該是220bp。第三幅圖擴(kuò)增的是基因組DNA，前兩個(gè)低點(diǎn)的是內(nèi)參引物，內(nèi)參引物是對的，中間兩個(gè)基因是之前一直沒有的基因A，基因A的引物在DNA中的目的條帶確實(shí)應(yīng)該是1000bp左右，不過中間是有內(nèi)含子的，而它在cDNA中的目的條帶應(yīng)為220bp，后面那倆沒擴(kuò)出來的是基因B，不過它在DNA中是10000bp，所以沒擴(kuò)出來，而在cDNA中的目的條帶是200bp。我的問題是： 1.為什么會(huì)發(fā)生這種情況？是引物不好使嗎？ 2.基因A在cDNA中擴(kuò)不出來，但是在基因組里卻擴(kuò)出來了，而且位置還是對的，這是什么原因？ 3.基因B在基因組里擴(kuò)不出來是因?yàn)樯舷掠我镌诨蚪M中相隔10000bp，但在cDNA中為什么能擴(kuò)出來，但位置不對？ 4.我之前自己設(shè)計(jì)的另一個(gè)基因B的引物能擴(kuò)增出來，而且位置也對，不過我查了卻沒在mRNA的編碼區(qū)內(nèi)，這樣會(huì)導(dǎo)致位置正確，但測序時(shí)卻不是我需要擴(kuò)的那段目的條帶嗎？ IMG_20161115_141010.jpg IMG_20161117_174145.jpg IMG_20161118_181157.jpg |
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2樓2017-02-21 19:10:45
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